[发明专利]一种鉴定甜瓜性型InDel分子标记及其引物和应用在审
| 申请号： | 201811511522.2 | 申请日： | 2018-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN109439790A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 王吉明;李娜;尚建立;周丹;马双武 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院郑州果树研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 青岛致嘉知识产权代理事务所(普通合伙) 37236 | 代理人： | 王增全 |
| 地址： | 450000 河南*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甜瓜 核苷酸序列 碱基 引物 分子标记辅助育种 分子检测技术 标记技术 分子育种 技术支持 片段缺失 引物扩增 种鉴定 染色体 酶切 应用 | ||
1.一种鉴定甜瓜性型的InDel分子标记，其特征在于，所述InDel分子标记InDel_msPr100位于甜瓜第2号染色体上，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，在SEQ ID NO.1所示序列自5’起第28碱基至第40碱基之间的GACAAATTTGAAC片段缺失，获得核苷酸序列如SEQID NO.2所示。
2.用于扩增权利要求1所述的InDel分子标记InDel_msPr100的引物对。
3.根据权利要求2所述的引物对，其特征在于，
上游引物F1:5’-AATGAAAATTTTGGTTTAATGGGA-3’，
下游引物R1:5’-AACCTCTCTCAACTTTGTGCTCAT-3’。
4.权利要求1所述的鉴定甜瓜性型的InDel分子标记InDel_msPr100在甜瓜性型分子标记辅助育种中的应用。
5.权利要求2或3所述的引物对在甜瓜性型分子标记辅助育种中的应用。
6.一种甜瓜性型基因型的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)采用CTAB法提取甜瓜叶片DNA；
(2)PCR扩增：利用权利要求3所述的引物对，对待测样品利用如下扩增体系进行PCR扩增：甜瓜叶片总DNA 1μL、权利要求3所述的上游引物F1 1μL、权利要求3所述的下游引物R11μL、2×Power Taq PCR MasterMix 12.5μL、ddH2O 9.5μL；
扩增程序为：94℃、5min；94℃、20s，55℃、1min，72℃、30s，共35个循环；72℃、5min；
(3)对PCR产物进行8％聚丙烯酰胺凝胶电泳，显影、染色和带型判读，如果出现127bp大小的片段，或包含序列如SEQ ID NO.1所示的片段，则判定待测甜瓜为单性花株；如果仅出现114bp大小的单一片段，或序列如SEQ ID NO.2所示的片段，则判定待测甜瓜为两性花株。
7.权利要求6所述的甜瓜性型的鉴定方法在甜瓜性型分子标记辅助育种中的应用。
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