[发明专利]一种同时检测甲型和乙型流感病毒的试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种同时检测甲型和乙型流感病毒的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板以及依次黏贴在所述底板上的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，所述结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的甲型和乙型流感病毒单克隆检测抗体，所述反应膜包括平行设置且相互间隔的第一检测区、第二检测区和对照区，所述第一检测区靠近所述结合垫，所述对照区靠近所述吸水垫，所述第二检测区位于所述第一检测区和所述对照区之间，所述第一检测区、第二检测区分别包被有识别单一抗原表位的甲型和乙型流感病毒单克隆捕获抗体，所述对照区包被羊抗鼠IgG抗体；优选地，所述反应膜为结合聚合物的硝酸纤维膜，优选地，所述聚合物为在小于450nm波长具有10％以下透光率，在500nm波长以上具有95％以上的透光率的材料；优选地，所述结合垫为玻璃纤维；优选地，所述底板为PVC底板。

2.根据权利要求1所述的检测甲型和乙型流感病毒的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，所述时间分辨荧光微球载有镧系元素或其螯合物，优选地，所述镧系元素为钐、铕或铽。

3.根据权利要求1或2所述的检测甲型和乙型流感病毒的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，所述时间分辨荧光微球的终浓度为1.0-1.5mg/ml，优选地，所述时间分辨荧光微球的直径为100nm-500nm。

4.根据权利要求1或2所述的检测甲型和乙型流感病毒的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，所述识别单一抗原表位的甲型和乙型流感病毒单克隆捕获抗体和羊抗鼠IgG抗体的终浓度分别为1-1.5mg/ml和0.5-1.0mg/ml，在所述反应膜上的包被量均为1-1.5μl/cm。

5.根据权利要求1或2所述的检测甲型和乙型流感病毒的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，优选地，所述样本垫与结合垫重合，重合部分长度约1-2mm；所述结合垫与反应膜有部分重合，重合部分长度约1-2mm；所述反应膜与吸水垫有部分重合，重合部分长度约1-2mm；所述检测线和对照线的长度约0.5-1.5mm；优选地，所述第一检测区和所述第二检测区的间隔为1-3mm，所述第二检测区和所述对照区间隔为3-5mm。

6.一种制备如权利要求1-5任一项所述的检测甲型和乙型流感病毒的时间分辨免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)在反应膜上分别固定识别单一抗原表位的甲型和乙型流感病毒单克隆捕获抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成第一检测区、第二检测区和对照区；

(2)制备时间分辨荧光微球标记的甲型和乙型流感病毒单克隆检测抗体，将制备好的时间分辨荧光微球标记的甲型和乙型流感病毒单克隆检测抗体按照1：1比例混合并喷涂在结合垫上；

(3)在底板上依次粘贴样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫，得到所述时间分辨荧光免疫层析试纸条。

7.根据权利要求6所述的检测流感病毒的时间分辨免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(2)进一步包括如下步骤：

(2.1)使用0.01-0.05mol/L的pH5.0-6.0的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，使EDC/NHS和微球终浓度分别为80-120mg/mL和1.0-1.5mg/mL，室温反应15-30分钟，充分洗涤微球，用0.02-0.05mol/L的pH8.0-8.5的硼酸缓冲液复溶；

(2.2)按甲型和乙型流感病毒单克隆检测抗体与微球的质量比为1:5-10的比例，在复溶后的微球中分别加入甲型和乙型流感病毒单克隆检测抗体，室温反应1-2小时，加入含有3％BSA的0.02mol/L的pH8.0-8.5的硼酸缓冲液，37℃反应1小时，洗涤，再用含有0.3％BSA，0.05％Tween-20的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸缓冲液复溶至原体积，于4℃避光保存；将制备好的时间分辨荧光微球标记的甲型和乙型流感病毒单克隆检测抗体按照1：1比例混合，使用时用定量喷膜仪以1-4μl/cm的量喷涂于玻璃纤维膜上，放入烘箱，40～60℃避光烘干。