[发明专利]一种甘蔗白叶病植原体的PCR检测方法在审
| 申请号： | 201811514170.6 | 申请日： | 2018-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN109371172A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 张荣跃;黄应昆;李文凤;单红丽;王晓燕;李婕;罗志明;尹炯;仓晓燕 | 申请（专利权）人： | 云南省农业科学院甘蔗研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/94 |
| 代理公司： | 云南凌云律师事务所 53207 | 代理人： | 康珉 |
| 地址： | 661699 云南省红河*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 植原体 甘蔗 特异性引物 检测 特异性条带 电泳结果 基因序列 检测样品 扩增产物 一次PCR 测序 扩增 感染 节约 优化 | ||
【权利要求书】：
1.一种检测甘蔗白叶病植原体的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物由引物SecA-F和引物SecA-R组成，所述引物SecA-F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，引物SecA-R的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.利用权利要求1所述的特异性引物检测甘蔗白叶病植原体的方法，其特征在于：
(1)反应体系：25μL PCR反应体系：灭菌双蒸水18.8μL，10×PCR缓冲液2.0μL，25mmol/LMgCl2 1.0μL，10mmol/L dNTPs 1.0μL，20μmol/L引物SecA-F 0.5μL，20μmol/L引物SecA-R0.5μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.2μL，模板DNA 1.0μL；
(2)反应程序：94℃预变性3min；94℃变性15s，58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸7min。
(3)取PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳，若扩增出350bp的单一条带，则检测样品感染了甘蔗白叶病植原体，扩增不出此条带则检测样品中不存在甘蔗白叶病植原体。
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