[发明专利]一种牛支原体的iiPCR检测方法及检测试剂盒有效
| 申请号： | 201811514557.1 | 申请日： | 2018-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN109536625B | 公开（公告）日： | 2023-01-03 |
| 发明（设计）人： | 储岳峰;翟肖辉;颜新敏;郝华芳;陈胜利;刘永生 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12Q1/686;C12R1/35 |
| 代理公司： | 深圳峰诚志合知识产权代理有限公司 44525 | 代理人： | 陈婷 |
| 地址： | 730046 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种牛 支原体 iipcr 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种牛支原体的iiPCR检测方法，所述检测方法用于非疾病诊断目的应用，通过iiPCR法检测牛支原体，其特征在于，该方法以牛支原体的P80基因序列为模板，从P80基因克隆出包含R1序列的M.b序列，
所述序列通过
M.b-specific-Forward：5’-CAAAGATAGTAGAGATAAACCT-3’和M.b-specific-Reverse：5’-CTGGTTCTTCATATATAACAAC-3’序列扩增得到，以该R1序列为目标设计探针M.b-specific-Probe；
其中，所述M.b序列如SEQ ID NO：1所示；
所述探针M.b-specific-Probe为：
5’-F-TGATGCTGCTTCATATGTATTCCC-Q-3’；其中，F为荧光报告基团，Q为荧光淬灭基团；
所述M.b序列的克隆引物为：M.b-specific-Forward：5’-CAAAGATAGTAGAGATAAACCT-3’；M.b-specific-Reverse：5’-CTGGTTCTTCATATATAACAAC-3’；
在步骤(3)中，所述iiPCR反应体系具体为：反应体系为50μL，其中Premix Ex Taq25μL，上、下游引物10μM各0.8μL，探针10μM 0.4μL，ddH2O 18μL，DNA模板5μL。
2.如权利要求1所述的牛支原体的iiPCR检测方法，其特征在于，所述iiPCR法包括以下步骤：
(1)以牛支原体的P80基因为模板并设计引物，PCR扩增得到M.b序列产物；
(2)切胶回收纯化后连接到pMD18-T载体上，然后将连接产物导入到DH-5a感受态细胞，筛选出阳性克隆子；
(3)建立iiPCR反应体系，该体系中包括探针M.b-specific-Probe，往该iiPCR反应体系分别加入牛支原体和其它基因组DNA为模板，检测阳性结果。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业科学院兰州兽医研究所，未经中国农业科学院兰州兽医研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811514557.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
