[发明专利]三七根腐病致病菌茄腐镰刀菌的Real-timePCR检测引物及方法

说明书

本发明公开了一种三七根腐病致病菌茄腐镰刀菌的Real‑time PCR检测引物及方法，检测引物的核苷酸序列为上游引物Fs‑QF:5’CCACGCTTGTGAGCTATGTAGTTC3’；下游引物Fs‑QR:5’CTCTTGAGGTAGACCACAGTAGGC3’；本发明设计茄腐镰刀菌的特异性引物，建立标准曲线用于茄腐镰刀菌的定性定量分子检测和病害准确诊断；利用本发明能明确复杂三七种植土壤以及三七病株中茄腐镰刀菌的数量动态变化，因而可以为三七土壤处理、根腐病的早期诊断和动态监测以及带病三七种子、种苗的分子检测提供技术支持。

技术领域

本发明涉及一种三七根腐病致病菌茄腐镰刀菌的Real-time PCR检测引物及其检测方法，专用于三七根腐病菌茄腐镰刀菌的快速分子检测，实现田间三七根腐病的早期诊断和病菌数量的动态监测，同时可用于土壤、三七种子及其种苗中根腐病菌数量的检测，属于植物病害的分子检测及诊断领域。

背景技术

三七[Panax notoginseng (Burk) F.H. Chen]为五加科(Araliaceae)人参属(Panax)多年生草本植物，别名山漆、金不换、血参、人参三七、佛手三漆、参三七、田七、滇三七、盘龙七。因其播种后三至七年方可采挖入药，而且每株长三个叶柄，每个叶柄生七个叶片，故名三七。三七根、根茎、叶、花均可入药，以根和根茎为主。三七使用历史近600年，栽培历史近500年，常在春冬两季采挖，分为“春七”和“冬七”。三七是中药材中的一颗明珠，清朝药学著作《本草纲目拾遗》中记载：“人参补气第一，三七补血第一，味同而功亦等，故称人参三七，为中药中之最珍贵者。”扬名中外的中成药“云南白药”和“片仔癀”，即以三七为主要原料制成。

三七、人参与西洋参是人参家族的主要成员。其中，三七的药效成分含量最高，主要成分有三七素（田七氨酸）、三七总皂苷（Panax notoginseng saponins，PNS）、黄酮、挥发油、氨基酸、糖类、微量元素(张静静, 刘桂芹. 植物三七中皂苷类化学成分的研究进展.聊城大学学报(自然科学版), 2018,31 (2): 1672-6634)。美籍华人植物药大师朱其岩在深入研究三七的药效成分后，认为三七所含有的化学成分超过任何一种中国参、高丽参、美国花旗参产品，赞叹“三七是人参之王”。目前以三七为原料的产品，从行业看，已经在制药、保健品、食品、化妆品与日用品等行业得到广泛应用。从产品剂型看，有注射剂、滴丸剂、片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、膏剂等。由于三七独特的功效，用途不断拓展，尤其在我国进入心脑血管疾病高发期的背景下，产品开发的深度和广度不断加强，市场需求巨大。云南白药集团、天津天仕力、广州白云山、玉溪维和、珍宝岛制药、上海华宇等企业都以三七为主要原料药。年需要量已接近8000吨，且用量仍逐年快速上涨。