[发明专利]玉米转化事件HiII-AtAAP1-1及其特异性鉴定方法与应用

权利要求书

1.用于检测或辅助检测待测植物样品是否为转基因玉米或其后代的方法，包括如下步骤：检测所述待测植物样品的基因组DNA中是否含有DNA片段A，

所述DNA片段A依次由左侧翼序列、外源DNA片段和右侧翼序列组成；

若所述待测植物样品的基因组DNA含有所述DNA片段A，则所述待测植物样品为或候选为所述转基因玉米或其后代；

若所述待测植物样品的基因组DNA不含有所述DNA片段A，则所述待测植物样品不为或候选不为所述转基因玉米或其后代；

所述左侧翼序列如SEQ ID NO.1所示；

所述右侧翼序列如SEQ ID NO.2所示；

所述转基因玉米是通过包括如下步骤的方法培养获得的：

将目的玉米基因组第10号染色体的第92016364-92016366位之间的碱基替换为外源DNA片段，得到转基因玉米；其中，所述目的玉米为玉米HiII；

所述外源DNA片段含有氨基酸通透酶基因AtAAP1表达盒和耐草铵膦基因bar表达盒；

所述转基因玉米的氮肥利用效率高于所述目的玉米和/或所述转基因玉米的耐草铵膦的能力高于所述目的玉米；

所述外源DNA片段依次由所述氨基酸通透酶基因AtAAP1表达盒、所述耐草铵膦基因bar表达盒、所述耐草铵膦基因bar表达盒和所述氨基酸通透酶基因AtAAP1表达盒组成；

所述外源DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述转基因玉米的氮肥利用效率高于所述目的玉米体现在如下B1)-B4)中任一种：

B1)所述转基因玉米的株高高于所述目的玉米；

B2)所述转基因玉米的叶绿素含量高于所述目的玉米；

B3)所述转基因玉米的全氮含量和/或总氮量高于所述目的玉米；

B4)所述转基因玉米的产量和/或百粒重高于所述目的玉米。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法为如下1)或2)或3)：

1)直接测序；

2)用引物对甲和/或引物对乙对待测植物样品的基因组DNA进行PCR扩增，检测扩增产物大小，若引物对甲扩增得到大小为673bp的条带和/或引物对乙扩增得到大小为631bp的条带，则所述待测植物样品为或候选为所述转基因玉米或其后代；否则，所述待测植物样品不为或候选不为所述转基因玉米或其后代；

所述引物对甲由SEQ ID NO.13所示的单链DNA分子和SEQ ID NO.14所示的单链DNA分子组成；

所述引物对乙由SEQ ID NO.15所示的单链DNA分子和SEQ ID NO.16所示的单链DNA分子组成；

3)用探针甲和/或探针乙对所述待测植物样品的基因组DNA进行Southern杂交，若能杂交得到杂交片段，则所述待测植物样品为或候选为所述转基因玉米或其后代；否则，所述待测植物样品不为或候选不为所述转基因玉米或其后代；

所述探针甲为以玉米基因组DNA为模板，采用由SEQ ID NO.17所示的单链DNA分子和SEQ ID NO.18所示的单链DNA分子组成的引物对进行PCR扩增得到的DNA片段；

所述探针乙为以玉米基因组DNA为模板，采用由SEQ ID NO.19所示的单链DNA分子和SEQ ID NO.20所示的单链DNA分子组成的引物对进行PCR扩增得到的DNA片段。