[发明专利]一种蔗糖磷酸化酶的固定化方法有效
| 申请号： | 201811517830.6 | 申请日： | 2018-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN109371006B | 公开（公告）日： | 2021-12-14 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;吴丹;宿玲恰;王淼淼 | 申请（专利权）人： | 江南大学（如皋）食品生物技术研究所;江南大学 |
| 主分类号： | C12N11/089 | 分类号： | C12N11/089;C12N9/10;C12P19/18;C12P19/12 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 226599 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蔗糖 磷酸化酶 固定 方法 | ||
1.一种固定化蔗糖磷酸化酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将产蔗糖磷酸化酶的枯草芽孢杆菌经发酵培养，离心收集上清，制得蔗糖磷酸化酶粗酶液；
（2）以5~15g氨基化树脂LX-1000EA或LX-1000HA为固定化载体，加入35~45mL、0.1 M、pH 8的PBS缓冲液，在25~28℃温度下，200 rpm震荡15 min后在室温静置0.5~1.5 h，用滤纸过滤后加入45~55ml的2%戊二醛中，在25~28℃温度下，200 rpm震荡4~6 h，用蒸馏水洗3次，洗去残留戊二醛，过滤得到处理后的氨基化树脂LX-1000EA和LX-1000HA；
（3）称取1 g步骤（2）中处理过的氨基化树脂LX-1000EA或LX-1000HA，加入步骤（1）中得到的蔗糖磷酸化酶，加酶量为4~11 U/g，于25~28℃，100 rpm震荡固定4~24 h，得到LX-1000EA固定化SPase和LX-1000HA固定化SPase。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养是以枯草芽孢杆菌SPase/pBSMuL3为生产菌株，在LB培养基中35~40℃培养8~10h，然后转接至TB发酵培养基中25~35℃培养45~50h。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加酶量为4 U/g、6 U/g、7 U/g、9 U/g或11 U/g。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定时间为4 h、8 h、12 h、16 h、20 h或24 h。
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