[发明专利]CMPF均相酶免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法

说明书

本发明公开了一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法，试剂盒的CMPF抗体的免疫原由CMPF与蛋白质或多聚赖氨酸偶联物作为免疫原进行免疫获得。分别利用CMPF支链末端的‑COOH与蛋白质或多聚赖氨酸分子上的‑NH2进行偶联；接着利用这些偶联物免疫物作为免疫原进行免疫小鼠或家兔，最后获得特异性的抗CMPF的单克隆或多克隆抗体；并基于该抗CMPF的单克隆或多克隆抗体建立CMPF含量检测方法；该检测方法可在生化分析仪等大型自动化仪器上进行大样本自动化检测分析。检测方法具有检测灵敏度高，特异性强，检测重复性高和稳定性好等优点，本发明方法检测灵敏度0.5μg/L。

技术领域

本发明涉及临床生化检测技术领域，具体为一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法,更具体为一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒、CMPF均相酶免疫检测试剂盒的制备方法，以及利用该试剂盒实现的呋喃脂肪酸代谢产物3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl--propyl-2-furanpropanoic acid，简称CMPF)含量的检测方法。

背景技术

蛋白结合类毒素是尿毒症毒素中重要的一类物质，其本身均为小分子物质(分子量＜500Da)，人体内该类物质易与人血清蛋白(human serumalbumin，HAS)结合，形成中大分子，马尿酸(hippuric acid，HA)、硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate，IS)、硫酸对甲酚(p-cresyl sulfate，PCS)及3-羧基-4--甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropionic acid，CMPF)为蛋白结合类毒素的典型代表。蛋白结合类毒素的蛋白结合率是研究蛋白结合类毒素代谢学的重要参数之一，与该类毒素在体内分布、代谢、发挥毒性及排泄密切相关，对临床治疗有重要意义。

除此之外，最近的研究发现，CMPF作为特定的呋喃脂肪酸代谢产物，其在妊娠糖尿病和2型糖尿病患者的血液中显著增加。小鼠实验表明，CMPF含量浓度的增加，可诱导葡萄糖耐受不良(glucose intolerance)，损坏葡萄糖刺激的胰岛素分泌，并降低葡萄糖的利用，从而导致胰腺中β细胞的胰岛素分泌下降，导致糖尿病的进一步发展。因此，CMPF也可用于糖尿病监控的生化指标。

发明内容

有鉴于此，本发明目的是提供一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒、制备方法及检测方法,具体为一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒、CMPF均相酶免疫检测试剂盒的制备方法，以及利用该试剂盒实现的外周血(包括血清、血浆和全血)等体液中呋喃脂肪酸代谢产物3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl--propyl-2-furanpropanoic acid，简称CMPF)含量的检测方法，检测方法具有检测灵敏度高，特异性强，检测重复性高和稳定性好等优点。

所采用的技术方案为：

本发明的第一方面，一种CMPF均相酶免疫检测试剂盒，包括如下试剂：

试剂R1,其含有CMPF抗体、NAD辅酶和G-6-P-Na2；

试剂R2，其含有G6PDH-CMPF偶联物和载体；

标准品溶液，其由CMPF与校准品稀释液梯度稀释而成，所述校准品稀释液含有缓冲液和载体。

进一步地，所述CMPF抗体为抗CMPF的特异性鼠源性单克隆IgG型抗体或抗CMPF的兔源性多克隆IgG抗体，所述特异性鼠源性单克隆IgG型抗体包括IgG1和/或IgG2a和/或IgG2b和/或IgG3和/或IgG4型抗体；所述兔源性多克隆IgG抗体包含F(ab')2特异性抗体片段。

进一步地，所述载体为载体蛋白质和/或多聚赖氨酸，所述载体蛋白质为BSA、OVA、KLH中的一种或多种。

进一步地，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液。