[发明专利]一种EBV病毒树鼩动物模型的建立方法

说明书

本发明公开了一种EB病毒树鼩动物模型的建立方法，经过动物选择、病毒液制备、接种、观察树鼩状态、接种树鼩后定期抽血，并分离PBMCs、qPCR测定PBMCs中EBV拷贝数、RT‑PCR检测PBMCs中EBV相关基因的表达、病理检测而建立的。本发明首次公开了树鼩EB病毒动物模型的建立方法，为更好的研究EB病毒生物学特性及其相关疾病打下基础；本发明中选用的树鼩为新型实验动物，其比目前已有的实验动物更加接近灵长类，其次树鼩对多种病毒具有易感性，具备易饲养、体积小、易获取等优点。

技术领域

本发明涉及动物模型制备领域，特别是涉及一种EBV病毒树鼩动物模型的建立方法。

背景技术

EB病毒(Epstein–Barrvirus，EBV)是Epstein和Barr于1964年首次从非洲儿童Burkitt淋巴瘤的细胞中分离得到的。EBV在人群中的感染率高达90％，大多处于隐性即潜伏感染状态，人类通常在婴幼儿时期就被感染，并无临床症状的终生携带。EBV通过唾液传播，也可通过血液或性途径传播，其靶细胞为B淋巴细胞，其次为上皮细胞。研究表明，在体外EBV可激发B淋巴细胞永生化。EBV与多种恶性肿瘤的发生密切相关，包括鼻咽癌、霍奇金病、Burkitt淋巴瘤、胃癌，国际癌症研究中心(IARC)对致癌因子进行分类，明确将其定位为I类致癌因子。此外EBV还与移植后淋巴细胞增殖性疾病、传染性单核细胞增多症、病毒相关性噬红细胞增多症等疾病的发生密切相关。目前还没有预防和治疗EBV感染的药物，对于EBV引起的相关恶性肿瘤，目前还得不到有效的防治或治疗。因此，构建EBV相关动物模型对于研究其生物学特性尤其是它在多种恶性肿瘤发生发展中的作用，以及疫苗与药物的研发至关重要。

从发现EBV至今，国内外学者建立的EBV动物模型包括灵长类动物、严重联合免疫缺陷小鼠、转基因动物及兔子和豚鼠四大类。以上这些动物模型在研究EBV感染、致病机制及预防治疗等方面有着重要作用，但也各自存在一些不足。在研究人类特有的疾病方面，如能使用更为接近灵长类的动物模型，在整体水平上将具有不可替代的优势。新世界猴作为最上述动物模型中唯一的灵长类动物，本具有不可替代的优势，但新世界猴物种濒临灭绝，极其珍贵，以及保护政策、伦理学的要求限制了其在EBV动物模型中的继续使用，导致自20世纪90年代后EBV新世界猴动物模型的研究停滞不前。因此，建立一种更为实用、有效的EBV动物模型成为近年来研究EBV及其相关疾病的迫切要求。

树鼩是一种生长于热带及亚热带地区的小型动物，属树鼩科，易饲养，寿命约8年。在我国，树鼩主要分布在云南、广西等地，近年来树鼩正越来越多的被科学家和生物医药领域采用。近期，中国科学院昆明动物研究所通过对树鼩全基因组、转录组及蛋白组的解析，证实了树鼩与灵长类的遗传特征接近，其在生理解剖、神经发育、及心理应激模式等方面与灵长类甚至人类之间存在高度的相似性。目前已有多项国内外研究表明，树鼩的许多病毒感染特性与人类相似，树鼩能被甲肝、乙肝、丙肝、轮状、腺、及疱疹等病毒感染。此外，树鼩作为耐药细菌感染和败血症、心理应激和抑郁症、近视及代谢性疾病等动物模型已成功建立。由此我们可以看出，树鼩作为一种新型的与灵长类更为接近的动物正得到密切的关注。研究表明，EBV的自然宿主范围仅为人类及包括棉顶狨猴，普通狨猴和猫头鹰猴等在内的新世界猴。由于树鼩与灵长类有着高度的相似特性，我们或许可以看到树鼩对于EBV的易感性以建立树鼩EBV动物模型的良好前景。

以上背景技术内容的公开仅用于辅助理解本发明的发明构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。

发明内容

本发明目的在于提出一种EB病毒树鼩动物模型的建立方法，具体的技术方案如下：

一种EBV病毒树鼩动物模型的建立方法，经过动物选择、病毒液制备、接种、观察树鼩状态、接种树鼩后定期抽血，并分离PBMCs、qPCR测定PBMCs中EBV拷贝数、RT-PCR检测PBMCs中EBV相关基因的表达、病理检测而建立的。