[发明专利]一种靶向多功能纳米粒及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种靶向多功能纳米粒及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域，采用超声双乳化法制备靶向多功能纳米粒，利用支化PEI与PLGA进行共价结合，将原本带负电荷的PLGA纳米粒修饰为携带正电荷的阳离子纳米粒，能够有效的吸附质粒，在循环系统中保证质粒不会因为物理作用而脱落，进入细胞后被胞内酶降解的机率也降低。该纳米粒中还含有IR780，能够靶向于肿瘤细胞线粒体，同时，IR780的强荧光和光敏剂特性使纳米粒成为一个很好的荧光和光声成像介质，方便观察肿瘤。该纳米粒中可以载药，以便联合转基因治疗，不但更有利于消灭肿瘤细胞，还能减少化疗药物的毒副作用。该靶向多功能纳米粒制备方法简单，易操作，适合扩大化生产。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种靶向多功能纳米粒及其制备方法和应用。

背景技术

小动物基因转染多数采用尾静脉直接注射质粒，但这种方法没有转染部位的特异性和精准性，以及存在注射后的质粒不能很好的进入细胞，且易被降解，转染效率低等缺陷，因而不适用于肿瘤的基因治疗。以纳米粒作为载体，由于肿瘤的EPR效应，纳米粒本身就有一种在肿瘤部位聚集吞噬的趋势，并且常用作药物缓释载体，因此可以将质粒包载到纳米粒中内水相里面，但是目前将质粒包载于纳米粒中内水相里面还存在两个弊端，一个是包载的过程中，合成纳米粒需要用到声震仪，这对于质粒是一种破环，使其出现开环的情况；其次，包载于内水相的质粒进入细胞后，其释放效率相比于吸附于表面而言会低很多。因此，急需一种释放效率高、靶向性好的多功能纳米粒。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种靶向多功能纳米粒的制备方法；目的之二在于提供一种靶向多功能纳米粒；目的之三在于提供靶向多功能纳米粒在制备肿瘤基因治疗药物中的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种靶向多功能纳米粒的制备方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将分子量为7000-12000的聚乳酸-羟基乙酸共聚物和七甲川花菁类荧光小分子IR780溶于二氯甲烷中，然后加入内水相，冰浴条件下超声处理，再加入聚乙烯醇水溶液，再次超声后加入异丙醇水溶液，获得混合液Ⅰ，搅拌所述混合液Ⅰ2.5-3.5h后去除所述二氯甲烷，最后离心获得沉淀Ⅰ，将所述沉淀Ⅰ洗涤后以MES缓冲液重悬获得重悬液，将所述重悬液放置于4-8℃下，备用；所述混合液Ⅰ中聚乳酸-羟基乙酸共聚物、七甲川花菁类荧光小分子IR780、内水相、聚乙烯醇和异丙醇的质量体积比为50:0.5-3:0.025-0.3:80-240:0.04-0.2，所述质量体积比的单位为mg:mg:mL:mg:mL；

(2)将N-羟基硫代琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶于MES缓冲液中，然后加入步骤(1)中获得的重悬液中，获得混合液Ⅱ，搅拌所述混合液Ⅱ2-2.5h，所述N-羟基硫代琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与步骤(1)中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比为15-25:60-75:50；

(3)将分子量≤25000的支化聚乙烯亚胺溶于MES缓冲液中，然后加入经步骤(2)处理后的混合液Ⅱ中，获得混合液Ⅲ，搅拌所述混合液Ⅲ2-2.5h后进行稀释，最后离心获得沉淀Ⅱ，将所述沉淀Ⅱ洗涤后冷冻干燥，即可；所述支化聚乙烯亚胺与步骤(1)中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量比为40-50:1。

优选地，步骤(1)中，所述内水相为水、化疗药物的水溶液或相变材料中的一种。

优选地，所述水为双蒸水；所述化疗药物的水溶液为盐酸多柔比星水溶液或硫酸长春新碱水溶液中的一种；所述相变材料为全氟正戊烷或全氟己烷中的一种。

优选地，步骤(1)中，两次超声的条件为：超声功率为135w，超声频率为20kHz，每间隔5s超声一次，每次超声时间为5s，共超声14-17次。