[发明专利]茶花粉分离蛋白的制备方法

说明书

本发明公开了一种茶花粉分离蛋白的制备方法，包括以下步骤：(1)取茶花粉，脱脂处理；(2)取步骤(1)脱脂茶花粉，破壁处理得到花粉溶液；(3)向步骤(2)得到的花粉溶液中，加入去离子水调整固液比为1:20‑80，调节pH至7.5‑12，恒温搅拌，离心取上清液；(4)调节步骤(3)收集的上清液pH至3.0‑5.0，离心分离出蛋白，洗涤后将蛋白液pH调至7.0，冷冻干燥得茶花粉蛋白。本发明制备方法采用多种破壁工艺，提高了蛋白质的得率，其中通过考查和比较蛋白质得率和蛋白质水解度，酶解‑超声复合破壁工艺效果最好；本发明制备所得茶花粉蛋白经过模拟胃肠道消化后所获得的水解物具有抗疲劳抗氧化的活性。

技术领域

本发明属于茶花粉的分离提取技术，特别是涉及一种茶花粉分离蛋白的制备方法。

背景技术

茶花粉是指蜜蜂从茶树花药内采集的花粉球，每年的9-11月是其生产时期，茶花粉多产于浙江、安徽、江苏、等地。新鲜的茶花粉具有特殊的茶香气息，尝起来味道略有些甜，其花粉颗粒大多呈橘红色。茶花粉具有提高人体免疫力、保护心脏降血压、抗老防衰等功效。其中含有丰富的蛋白质、不饱和脂肪酸、黄酮、多酚、多糖等活性物质。其中花粉蛋白质含量尤其丰富，一般平均含量在20％左右。

花粉具有特殊的细胞壁，其外壁较为坚硬，孢粉素、纤维素和花粉素等致密物质构成了花粉壁，其存在不仅可以抵抗极高的温度和极大的压力、还可以耐腐蚀，对于物理、化学及酶的降解都较稳定。这层花粉壁极为坚硬，所以在制备花粉分离蛋白的时候，需采用破壁处理。目前国内外较常见的破壁方法主要有物理破壁和生物破壁法。而关于破壁方法对所制备的蛋白质的分子量和消化吸收率的影响未见报道。并且未见关于茶花粉分离蛋白的制备相关报道。

发明内容

发明目的：针对上述现有技术的缺陷，本发明提供了一种能够获得更易于消化吸收的茶花粉分离蛋白的茶花粉分离蛋白的制备方法。

技术方案：本发明所述的一种茶花粉分离蛋白的制备方法，包括以下步骤：

(1)取茶花粉，脱脂处理；

(2)取步骤(1)脱脂茶花粉，破壁处理得到花粉溶液；

(3)向步骤(2)得到的花粉溶液中，加入去离子水调整固液比为1:20-80，调节pH至7.5-12，恒温搅拌，离心取上清液；

(4)调节步骤(3)收集的上清液pH至3.0-5.0，离心分离出蛋白，洗涤后将蛋白液pH调至7.0，冷冻干燥得茶花粉蛋白。

步骤(1)中，所述茶花粉置于索氏提取器脱脂，脱脂溶剂为石油醚(30-60沸程)，虹吸2-3次后，取出得到的脱脂花粉。

步骤(2)中，所述破壁处理采用超声波破壁处理、温差破壁处理和酶解破壁处理中的一种或者多种方式进行。复合破壁包括温差-超声、酶解-超声等方式。

进一步的，所述超声波破壁处理是指：取脱脂茶花粉，以1：6-16(g/mL)固液比分散在去离子水中，搅拌溶解，然后使用超声波细胞粉碎机对其进行处理；超声波细胞粉碎机处理条件为：超声强度200-600w，超声时间5-40分钟，超声开时间0-5秒，超声关时间0-5秒。

进一步的，所述温差破壁处理是指：取脱脂茶花粉，放于零下4-零下80℃冷冻0-48h，然后以料液比1：6-16(g/mL)加入50-100℃热水，搅拌溶解，然后放入25-90℃水浴锅里水浴1-12h。

进一步的，所述酶解破壁处理是指：取脱脂茶花粉，以1：6-16(g/mL)固液比分散在去离子水中，搅拌溶解，调整pH为2.0-6.0，加入复合酶，25-65℃酶解，酶解完成后放入60-100℃水浴锅中2-20分钟使酶失活。

其中，所述复合酶组成为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和木瓜蛋白酶。