[发明专利]一种基于高内涵技术在异形红细胞检测中的应用方法

说明书

本发明涉及异形红细胞的识别与分析相关技术领域，尤其涉及一种基于高内涵技术在异形红细胞检测中的应用方法，包括以下步骤，步骤一：全血标本处理；步骤二：使用高内涵分析系统对处理好的全血标本进行拍照；步骤三：使用高内涵分析系统对所拍摄的红细胞进行识别与分析；步骤四：使用高内涵分析系统进行计算。本发明提供了高内涵分析系统应用于异形红细胞拍照的全血标本处理方法，以及建立了高内涵分析系统应用于异形红细胞识别与分析程序。本发明为有效识别异形红细胞及计算异形红细胞比例提供了一种新方法；本发明所建立的高内涵分析系统可较好地完成对单个及多个异形红细胞的识别、分析。

技术领域

本发明涉及异形红细胞的识别与分析相关技术领域，尤其涉及一种基于高内涵技术在异形红细胞检测中的应用方法。

背景技术

红细胞(erythrocyte)也称红血球，是血液中数量最多的一种血细胞，其主要功能是运输氧气，同时对机体产生的酸碱性物质起缓冲作用，并具有一定免疫功能。外周血正常成熟红细胞直径约为6～9μm，中心区域由于血红蛋白含量相对边缘较少而呈双凹圆盘形，这种独特的形状使得红细胞具有较大的表面积与体积之比，在维持其正常生理功能方面发挥重要作用。

目前，红细胞形态观察以在普通光学显微镜下观察血涂片为主，通过血涂片可以观察红细胞形态、大小、着色、排布以及包涵体等情况，因其制备简单快捷，在临床上应用广泛。然而，由于制备血涂片时红细胞易发生形变，且血涂片上的红细胞多排布密集，人工分类计数难度高、误差大，因此血涂片一般仅用于观察典型的异形红细胞如镰刀形红细胞、破碎红细胞、鱼形红细胞等。随着计算机科学技术的发展，出现了基于扫描电镜成像的红细胞表面特征提取与分类研究，但扫描电镜面临着制作成本高、样本处理复杂等问题。

高内涵技术(High-content screening，HCS)是近年来发展起来的一种全新的细胞分析工具，其可在保持细胞结构和功能完整性的前提下，同时检测被筛样品对细胞生长、分化、迁移、凋亡、代谢途径及信号转导等各个环节的影响，在单一实验中获取大量与基因、蛋白及其他细胞成分相关的信息，确定其生物活性和潜在毒性的过程。

因此，亟需提供一种基于高内涵技术在异形红细胞检测中的应用方法。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了解决现有技术的上述问题，本发明提供一种基于高内涵技术在异形红细胞检测中的应用方法。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

本发明提供一种基于高内涵技术在异形红细胞检测中的应用方法，包括以下步骤：

步骤一，全血标本处理

具体实验步骤如下

①首先取EDTA-K2抗凝全血450～550μL于1ml的EP管中，然后进行500g离心4～6min去除血浆，得到浓缩红细胞悬液；

②然后加入700～900μL的0.9％氯化钠溶液至浓缩红细胞悬液中，轻轻颠倒混匀后，然后进行500g离心3～5min，静置后除去上清液，重复该步骤两次，得到洗涤后浓缩红细胞；

③取4～6μL洗涤后浓缩红细胞至装有1mL 0.9％氯化钠溶液的EP管中，轻轻颠倒混匀后，得到红细胞悬液A；

④取9～11μL红细胞悬液A至装有1mL 0.9％氯化钠溶液的EP管中，轻轻颠倒混匀后，得到红细胞悬液B；

⑤取80～120μL红细胞悬液B沿孔壁匀速注入高内涵专用的96孔板中，400g离心19～21min；

步骤二，使用高内涵分析系统对处理好的全血标本进行拍照

所编写的高内涵对红细胞拍照程序为：