[发明专利]一种人血液样本的保存及RNA提取方法

权利要求书

1.一种人血液样本的保存及RNA提取方法，包括采集血液，保存血液样本，和血液样本中RNA的提取，其特征在于，所述采集血液的方法为：用装有抗凝剂和Trizol试剂的负压采血管采集血液，用手振荡10-15S，得到血液样本，室温保存。

2.根据权利要求1所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，所述血液样本中RNA的提取步骤包括：

S1.上下翻转血液样本，用枪头吹吸5-10次至血液样本均匀，移取400μL血液样本至1.5mL的离心管内，加入氯仿，漩涡振荡15-20S，室温孵育10-15min，离心；

S2.将步骤S1离心后的上清液转移至1.5mL的离心管内，加入异丙醇，漩涡振荡5-10S，室温孵育10-12min，离心，移除上清液，离心管内的沉淀物备用；

S3.往步骤S2中离心管内的沉淀物中加入体积浓度为75％的乙醇，翻转离心管5-10次，离心，移除上清液，室温下晾置，得到RNA。

3.根据权利要求1所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，所述用于采集血液的负压采血管内的抗凝剂、Trizol试剂和负压的比例为0.8-1.2mL:5.5-8.0mL:2.8-4.0mL。

4.根据权利要求2所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，还至少包括以下技术特征之一：

所述步骤S1中，上下翻转血液样本的次数为5-10次，加入氯仿的体积为移入离心管内的血液样本中Trizol试剂的体积的1/5-1/4，离心的条件为12000g、4℃下离心15min；

所述步骤S2中，加入的异丙醇的体积为步骤S1移入离心管内的血液样本中Trizol试剂的体积的1/2，离心条件为12000g、4℃下离心8min；

所述步骤S3中，加入的乙醇的体积为1-1.5mL，离心条件为室温下7500g离心5min，室温下晾置的时间为5-8min。

5.根据权利要求1所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸或其盐，所述乙二胺四乙酸或其盐的浓度为0.5-0.8mol/L。

6.根据权利要求4所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，步骤S1中，在加入氯仿之前，先加入1-2μL糖原，漩涡振荡10-15S，然后室温孵育10-15min。

7.根据权利要求6所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，所述糖原的质量浓度为1-1.5μg/μL。

8.根据权利要求1-7任一项所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，所述血液样本在室温下保存30天以内，提取得到的RNA的RIN值超过8.0。

9.根据权利要求8所述的人血液样本的保存及RNA提取方法，其特征在于，在采集血液，获得血液样本后的第10min进行RNA提取，得到的RNA的RIN值超过9.0。

10.一种负压采血管，其特征在于，所述负压采血管内装有抗凝剂和Trizol试剂，抗凝剂、Trizol试剂和负压的比例为0.8-1.2mL:5.5-8.0mL:2.8-4.0mL。