[发明专利]人皮肤细胞生长因子的纳米粒脂质体的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种人皮肤细胞生长因子的纳米粒脂质体的制备方法及其应用，本发明采用乙醇注入法制备包裹人皮肤细胞生长因子的纳米脂质体，利用其纳米制剂效应与脂质体的生物相容性特点，可显著提高皮肤吸收滞留的效率，促进其疗效的充分发挥，提高了皮肤细胞生长因子在活体或者细胞中的作用效果。该方法操作简单，封装效率高，人皮肤细胞生长因子可以被容易地递送到活体皮肤创伤内层或需美容皮肤深层细胞中，同时保持人皮肤细胞生长因子具有高的生理活性。

技术领域

本发明涉及一种人皮肤细胞生长因子的纳米粒脂质体的制备方法及其应用，属于生物医学领域。

背景技术

英国学者Bangham和Standish在1961年通过电镜发现当磷脂分子分散在水中时会自然形成有序排列的类似生物膜结构的多层囊泡。后来，人们将这种具有双层膜形态的生物膜结构的中空小球通称为脂质体。随着近年来生物技术的发展，人们已研究出各种不同类型的脂质体，如阳离子脂质体、前体脂质体、长循环脂质体等。脂质体技术已广泛的应用到制药、生物、遗传、化工、食品等各个领域。固体脂质纳米粒(Solid lipidnanoparticles,SLN)是20世纪90年代初发展起来的新一代亚微粒给药系统，是指粒径在10～1000nm，以固态天然或合成的类脂如卵磷脂、三酰甘油等为载体，将药物包裹或夹嵌于类脂核中制成的固体胶粒给药系统，以毒性低、生物相容性好、生物可降解的固态天然或合成的类脂为载体，将药物吸附或包裹于脂质膜中制成的新一代纳米粒给药系统。采用脂质体包埋可以很好地解决渗透性低这一问题，它制备工艺简单，且粒径小，冻干成粉后便于运输和使用，具有广泛的应用前景。

纳米颗粒脂质体(Nanoliposomes)是粒径为10-100nm的单室脂质体，其不仅具有脂质体的良好性质，还在稳定性、吸收和体内分布等方面呈现纳米效应，因此在药物制剂领域有着广泛的应用前景，是纳米药物载体研究的新途径。

人皮肤细胞生长因子是在人体内存在的一类细胞生长因子，它的主要功能是促进皮肤细胞的分裂、增殖和分化，从而以新生的细胞代替衰老和死亡的细胞。研究表明：极微量的细胞生长因子即能强烈刺激细胞生长，抑制衰老基因表达，阻止皮肤衰老，使皮肤各组成成份保持最佳生理状态。此外，它还能刺激细胞外一些大分子(如透明质酸和胶原蛋白等)的合成与分泌，滋润皮肤，是决定皮肤活力和健康的关键因素。另有研究发现人皮肤细胞生长因子具有加速皮肤和粘膜创伤愈合，消炎镇痛，防止溃疡的功效。

但由于人皮肤细胞生长因子稳定性差，并且对温度和pH等敏感，极易失活，其还有分子量大不易透皮等缺点，极大地限制了其在临床方面的应用。

发明内容

本发明克服了上述现有技术的不足，揭示一种人皮肤细胞生长因子的纳米粒脂质体的制备方法及其应用。采用创新纳米脂质体技术，将人皮肤细胞生长因子包裹在纳米脂质体里面，利用其纳米制剂效应与脂质体的生物相容性特点，可显著提高皮肤吸收滞留的效率，促进其疗效的充分发挥，可以开发为具有促进创面愈合作用的医疗器械产品和有美容护肤作用的高端化妆品。

该新型包裹人皮肤细胞生长因子的纳米脂质体的制备方法是乙醇注入法，此方法操作简单，封装人皮肤细胞生长因子的效率高，人皮肤细胞生长因子可以被容易地递送到活体皮肤创伤内层或需美容皮肤深层细胞中，同时保持人皮肤细胞生长因子具有高的生理活性，进而使人皮肤细胞生长因子在活体或细胞中发挥高效的作用。

一种人皮肤细胞生长因子纳米粒脂质体的制备方法，包括以下步骤：

1)人皮肤细胞的分离：利用人皮肤原始样本分离获得人的原代皮肤细胞；

2)人皮肤细胞生长因子的制备：将步骤1)中获得的原代皮肤细胞进行培养、传代，收集皮肤细胞的细胞培养液，经过清洗、酶消化、中和、离心后即可获得人皮肤细胞生长因子；

3)人皮肤细胞生长因子的纳米粒脂质体的制备：通过乙醇注入法利用纳米颗粒脂质体直接包埋步骤2)所获得的人皮肤细胞生长因子，获得人皮肤细胞生长因子的纳米粒脂质体。