[发明专利]一种筛选防治帕金森病药物的方法在审
申请号: | 201811529592.0 | 申请日: | 2018-12-14 |
公开(公告)号: | CN109620971A | 公开(公告)日: | 2019-04-16 |
发明(设计)人: | 邓兴力;钱源;陆地;李力燕 | 申请(专利权)人: | 昆明医科大学第一附属医院 |
主分类号: | A61K49/00 | 分类号: | A61K49/00;A01K67/027;C12Q1/6883;G01N33/68 |
代理公司: | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人: | 汤东凤 |
地址: | 650034 *** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 帕金森病药物 动物模型 筛选 防治 蛋白检测 多巴胺 纹状 检测 体内 免疫荧光法检测 生物医学技术 发病机制 分子基础 帕金森病 实验流程 治疗策略 变化量 成套的 鼠模型 制备 研究 成熟 应用 | ||
1.一种筛选防治帕金森病药物的方法,其特征在于:包括以下步骤:
①应用6-OHDA制备偏侧PD鼠模型;
②Western blot和RT-PCR检测纹状体内多巴胺相关因子的表达量;
③免疫荧光检测纹状体内TH和Iba1的变化。
2.根据权利要求1所述的筛选防治帕金森病药物的方法,其特征在于:所述步骤①中应用6-OHDA制备偏侧PD鼠模型的步骤如下:
通过黑质-纹状体通路定位注射6-OHDA建立大鼠PD模型,6-OHDA的注射量为每点4μL;术后腹腔注射青霉素抗感染;术后2周,腹腔注射APO诱发旋转行为,注射10min后,记录大鼠旋转圈数,共记录30min;平均转速≥7转/min者定义为PD阳性,连续3周阳性的则认为造模成功。
3.根据权利要求1所述的筛选防治帕金森病药物的方法,其特征在于:所述多巴胺相关因子包括Nurr1、DAT、Pitx3、TH。
4.根据权利要求3所述的筛选防治帕金森病药物的方法,其特征在于:所述巴胺相关因子所用引物序列如下:
Nurr1基因的引物序列:
F:5′-AAGCCACCTTGCTTGTACCAAA-3′,
R:5′-CTTGTAGTAAACCGACCCGCTG-3′;
TH基因的引物序列:
F:5′-CAGGGCTGCTGTCTTCCTAC-3′,
R:5′-GGGCTGTCCAGTACGTCAAT-3′;
DAT基因的引物序列:
F:5′-TTGCAGCTGGCACATCTATC-3′,
R:5′-ATGCTGACCACGACCACATA-3′;
Pitx3基因的引物序列:
F:5′-CTTAGTCCCTGCCAGTACGC-3′,
R:5′-GTGAGCCAAGGGTGAATTG-3′。
5.根据权利要求1所述的筛选防治帕金森病药物的方法,其特征在于:大鼠给药发生在步骤①应用6-OHDA制备偏侧PD鼠模型之前或之后。
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