[发明专利]一种筛选防治帕金森病药物的方法

说明书

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种筛选防治帕金森病药物的方法。现已有较为成熟的动物模型用于研究帕金森病的发病机制及治疗策略，但是动物模型完成后的相关分子基础的检测及评价方法有待建立。本发明提供的筛选防治帕金森病药物的方法包含动物模型的建立以及相关蛋白检测方法的建立，所述动物模型是应用6‑OHDA制备偏侧PD鼠模型；所述相关蛋白检测是用Western blot和qPCR检测纹状体内多巴胺相关因子的变化量；用免疫荧光法检测纹状体内TH和Iba1的变化；所述检测的多巴胺相关因子包括Nurr1、DAT、Pitx3、TH。本筛选防治帕金森病药物的方法为筛选防治帕金森病药物或手术方法提供成套的实验流程方法，方便研究者进行相关研究。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种筛选防治帕金森病药物的方法。

背景技术

帕金森病(Parkinson’sdisease，PD)是一种常见的神经系统变性疾病，老年人多见，平均发病年龄为60岁左右。我国65岁以上人群PD的患病率大约是1.7％。大部分帕金森病患者为散发病例，仅有不到10％的患者有家族史。帕金森病最主要的病理改变是中脑黑质多巴胺(dopamine，DA)能神经元的变性死亡，由此而引起纹状体DA含量显著性减少最终导致疾病发生。导致这一病理改变的确切病因目前仍不清楚，遗传因素、环境因素、年龄老化、氧化应激等均可能诱导PD多巴胺能神经元的变性死亡。

随着帕金森病发病率的增加，防治帕金森病的药物研究成为现代医学的研究热点，但是相关的药物筛选模型或是药效评价方法还很缺乏，现有的帕金森疾病模型常用的一种是应用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注入黑质纹状体系统来损毁大鼠黑质-纹状体系统多巴胺(DA)能神经元所制成的模型，此模型应用较为广泛，但是后续评价流程还很缺乏，评价方法通常为肉眼观察实验动物的行为表现，相关生物学方面的检测缺乏。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种筛选防治帕金森病药物的方法，本发明的筛选方法包括帕金森动物模型的构建和实验检测相关因子变化量，所选用的PD相关评价因子包括Nurr1、DAT、Pitx3、TH、Iba1，通过Westernblot、PCR和免疫荧光法检测上述相关因子的含量，从而评价药物作用效果。

为了达到上述目的，本发明的技术方案是：

一种筛选防治帕金森病药物的方法，包括以下步骤：

①应用6-OHDA制备偏侧PD鼠模型；

②Westernblot和RT-PCR检测纹状体内多巴胺相关因子表达量的变化；

③免疫荧光检测纹状体内TH和Iba1的变化。

进一步，上述的应用6-OHDA制备偏侧PD鼠模型的步骤如下：

通过黑质-纹状体通路定位注射6-OHDA建立大鼠PD模型，6-OHDA的注射量为每点4μl。术后腹腔注射青霉素抗感染，连续一周。术后2周后，腹腔注射APO诱发旋转行为。注射10min后，手动计数SD大鼠旋转圈数，共记录30min。平均转速≥7r/min者定义为PD阳性，连续3周阳性的则认为造模成功。

进一步，上述的多巴胺相关因子包括Nurr1、DAT、Pitx3、TH。

进一步，上述步骤②RT-PCR检测纹状体内多巴胺相关因子所用引物序列如下：

Nurr1基因的引物序列：

F：5′-AAGCCACCTTGCTTGTACCAAA-3′，

R：5′-CTTGTAGTAAACCGACCCGCTG-3′；

TH基因的引物序列：

F：5′-CAGGGCTGCTGTCTTCCTAC-3′，