[发明专利]一种草菇9715菌株液体菌种培养终点的确认方法

权利要求书

1.一种草菇9715菌株液体菌种培养终点的确认方法，包括：

(1)将草菇的液体培养基中接入母种，进行培养，并取样进行测定；

测定包括：菌丝体质量的测定，培养液的pH值测定，发酵滤液的OD值、糖度测定，还原糖的测定，菌丝体及菌液蛋白质含量测定，漆酶活性测定，羧甲基纤维素酶CL活性测定，半纤维素酶ACX活性测定中的一种或几种；

(2)将上述测得的数据得到变化趋势图，确定草菇液体菌种的培养终点。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中液体培养基为葡萄糖25g，酵母粉4g，KH₂PO₄ 1g，MgSO₄ 1g，加蒸馏水定容至1L，调pH为9.0，装液量为120mL培养基置于250mL三角瓶中；液体培养基在121℃下灭菌15min，冷却后待接种。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中接入母种具体为：将活化的母种打孔，取菌块加入无菌水经均质仪打碎后，以15mm²为1％的菌种接种量，接入2％的菌液。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中培养为32℃、转速125r/min摇床上振荡培养7d。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中取样具体为：从48h起，每12h收取一次样品为一个处理，每处理5个重复。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中菌丝体质量的测定：用无纺布过滤培养的菌丝，无菌水冲洗后再用无菌吸水纸吸干水分，于-20℃冰箱冷冻过夜，转入最低温保持在-50℃左右的冷冻干燥机中充分干燥至恒重，用分析天平称量菌丝体干重。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中pH值测定：用pH计测量培养液的pH值；发酵滤液的OD值在波长540nm处测定。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中还原糖的测定为：采用3,5-二硝基水杨酸3,5-dinitrosalicylic acid,DNS法在波长540nm下测定；菌丝体及菌液蛋白质含量测定：采用考马斯亮蓝法，在波长595nm处测定。

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中漆酶活性测定：取发酵滤液为样品，用漆酶试剂盒测定菌液中的漆酶活性；羧甲基纤维素酶CL活性测定：取发酵滤液为样品，用羧甲基纤维素酶试剂盒测定菌液中的纤维素酶活性；半纤维素酶ACX活性测定：取发酵滤液为样品，用半纤维素酶试剂盒测定菌液中的半纤维素酶活性。

10.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤(2)中测得的数据采用Excel 2013进行分析做图，得到菌丝活性变化趋势图，综合评价各指标确定草菇液体菌种的培养终点。