[发明专利]一种草菇9715菌株液体菌种培养终点的确认方法

说明书

本发明涉及一种草菇9715菌株液体菌种培养终点的确认方法，包括：将草菇的液体培养基中接入母种，进行培养，并取样进行测定，将测定数据得到变化趋势图，确定草菇液体菌种的培养终点。本发明方法涉及草菇液体菌种及培养环境的生理生化指标变化，对液体菌种发酵过程控制具有指示性，能够有效判断草菇液体菌种的菌丝活力状态，能精准确定草菇液体菌种培养终点的时间，取得了较好的效果。

技术领域

本发明属于草菇液体菌种培育领域，特别涉及一种草菇9715菌株液体菌种培养终点的确认方法。

背景技术

草菇(Volvariella volvacea)，又名兰花菇、稻草菇、广东菇和中国菇等，是一种原产于热带、亚热带高温多雨地区的腐生性真菌，多生长在稻草、香蕉叶等富含纤维的基质上，营养丰富，富含蛋白质、多糖和纤维素等物质，品质细嫩、味道鲜美，颇受消费者青睐。我国是最早栽培草菇的国家，距今已有300多年的历史。草菇消费量逐年增加，草菇产业发展潜力巨大。

为适应新形势下食用菌产业的发展，食用菌液体菌种用于工厂化生产成为研究热点。液体菌种具有生长迅速、菌龄整齐、制种简便、使用方便、接种点多、萌发和现蕾快，菇产量高、周期短等优点，同时对于降低生产成本，提高产品质量具有显著效果。菌种质量是决定栽培成功与否的先决条件，液体菌种最佳培养终点的确定能更好地判断菌丝活力状态，进而影响栽培效果。在一些关于液体菌种发酵终点的报道中，常将菌丝体重量作为唯一的衡量指标，然而菌丝生物量与菌丝活力之间并没有必然联系。

张一帆等(张一帆,陈多扬,周振辉,等.草菇液体菌种培养过程中的变化和培养终点的研究[J].种子,2012,31(12):9-13,20.)对草菇液体菌种培养过程的变化和培养中终点的研究，针对草菇V23菌株，观察和测定了草菇液体菌种中菌丝体的外观、光学显微结构、菌丝体干重、蛋白质含量及其组成、培养残液中的含糖量和pH值，并结合栽培出菇产量情况，综合评价了草菇V23菌株液体菌种的培养终点。其中取样时间分别为培养5、6、7、8d的菌丝，且各培养时间点上的菌丝体外观和显微结构相似，难以区分；通过SDS-PAGE分析蛋白质条带组成，也无法将各培养时间点的样品加以区分；最终仅以菌丝体干重、干菌丝体蛋白质含量、培养残液pH和含糖量结合栽培出菇情况(无明显差异)，从栽培周转时间考虑，最终将草菇V23菌株液体菌种摇瓶的最佳培养终点时间为6d。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种草菇9715菌株液体菌种培养终点的确认方法，克服了现有技术如取样时间分别为培养5、6、7、8d的菌丝，且各培养时间点上的菌丝体外观和显微结构相似，难以区分；通过SDS-PAGE分析蛋白质条带组成，也无法将各培养时间点的样品加以区分等技术缺陷，本发明通过检测培养过程中影响草菇液体菌种活性的生理指标，如液体菌种菌丝体干重、蛋白含量，培养液pH、糖度、还原糖含量、酶活性等参数来确定液体菌种的发酵终点，为草菇液体菌种培养过程中的控制及培养终点的判断提供了可靠的技术参数，并为草菇液体菌种发酵培养的进一步放大和生产利用奠定基础。

本发明的一种草菇液体菌种培养终点的确认方法，包括：

(1)液体菌种培养及样品收集：

草菇液体菌种的培养置于合适的三角瓶中，将母种接入草菇的液体培养基中，进行培养，并取样进行测定；

测定包括：菌丝体质量的测定，培养液的pH值测定，发酵滤液的OD值、糖度测定，还原糖的测定，菌丝体及菌液蛋白质含量测定，漆酶活性测定，羧甲基纤维素酶CL活性测定，半纤维素酶ACX活性测定中的一种或几种；

(2)将上述测得的数据得到变化趋势图，确定草菇液体菌种的培养终点。

步骤(1)中选取250mL三角瓶，培养基装液量120mL。