[发明专利]一种检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染的引物、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及一种检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染的引物、试剂盒及方法，属于生物医药技术领域。本发明的检测Vesivirus 2117病毒的实时荧光定量PCR引物序列为：正向引物：5′‑ACGTTGACGATAGGGGGAGA‑3′；反向引物：5′‑CTTTGGCAAAGACCCCGTTG‑3′；试剂盒还包括阳性质控品和内参管家基因GAPDH引物序列，其引物序列为：正向引物：5′‑CCCATGGCAAGTTCAAAGGCA‑3′；反向引物：5′‑TGGTGAAGACGCCAGTAGATT‑3′。本发明的试剂盒具有高灵敏度、高特异性、高效率高的特点，且操作简单，节约时间。

技术领域

本发明涉及一种检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染的引物、试剂盒及方法，属于生物医药技术领域。

背景技术

Vesivirus 2117属于杯状病毒科，该病毒是生物医药产业细胞培养操作中的污染物之一。杯状病毒科是一个普遍存在的小圆形病毒家族，存在于海洋及某些陆地哺乳动物体内。病毒粒子无包膜，直径为27-40nm，具有二十面体对称性。有些病毒粒子的特征表面有32杯状凹陷的外观，而肠道杯状病毒颗粒缺乏特征表面装饰、外观模糊。Vesiviruses的RNA基因组含有三个主要的开放阅读框(open reading frames，ORF-1，-2，-3)。ORF-1编码一种蛋白水解的成熟的非结构蛋白。ORF-2编码主要衣壳蛋白VP1，ORF-3编码小结构蛋白VP2。目前，关于Vesivirus2117在细胞培养环境中的生物学特性、致病性和感染范围研究较少。

中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)是目前常用的哺乳动物细胞，近70％的重组药物蛋白是由CHO细胞产生的。相比其他重组蛋白生产中使用的细胞系，CHO细胞来源的病毒污染较少，但也有发生，疱疹病毒属2117是目前CHO细胞感染的病毒。被病毒污染的CHO细胞会导致重组蛋白的产量严重降低，进而导致医疗用品供应不足。因此建立Vesivirus 2117病毒的快速检测方法，具有十分重要的意义和应用价值。

目前对病毒核酸的检测方法较为简便的方法是实时荧光定量PCR，实时荧光定量PCR有荧光染料和荧光探针之分，荧光探针特异性好但成本高，而常用的荧光染料SYBRGreen I因扩增时要求浓度低导致扩增信号较弱，无法解决由于浓度较低造成的染料重分布问题，而且低熔点的cDNA链可能由于染料重分布问题而无法检测到，使其检测的可靠性降低。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种检测Vesivirus 2117病毒的实时荧光定量PCR引物。该引物能快速检测CHO细胞是否被Vesivirus 2117病毒污染。

本发明还提供一种检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染的试剂盒。该试剂盒的扩增信号强，能解决染料重分布的问题。

另外，本发明提供一种检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染的实时荧光定量PCR方法。该检测方法用时短，通过该方法能快速、准确地检测出CHO细胞是否被Vesivirus2117病毒污染。

最后，本发明提供一种上述检测Vesivirus 2117病毒的实时荧光定量PCR引物、或检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染的试剂盒在检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染方面的应用。该引物和试剂盒用于检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染情况，其稳定性好，敏感度高。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种检测Vesivirus 2117病毒的实时荧光定量PCR引物，引物序列如下：

正向引物：5′-ACGTTGACGATAGGGGGAGA-3′；

反向引物：5′-CTTTGGCAAAGACCCCGTTG-3′。