[发明专利]Slc26a4基因L236P突变小鼠模型的建立方法

说明书

本发明公开了一种Slc26a4基因L236P突变小鼠模型的建立方法，先找到Slc26a4基因的第六外显子上确定一段靶序列，并将连好的px330质粒和体外合成的修复模板共同转入受精卵的细胞核中，将受精卵移植到假孕雌性小鼠输卵管内等待发育产下F0代幼崽；剪下小鼠的脚趾进行基因组提取和测序，将含有靶点附近的突变的小鼠进行T/A克隆实验并进行测序，将含有L236P基因突变的雄性小鼠和野生型CBA/CaJ雌性小鼠交配，产下F1代杂合小鼠；将F1代杂合小鼠自交产生后代，并对后代进行PCR和测序，即完成Slc26a4基因L236P突变小鼠模型的建立。

技术领域

本发明涉及一种基因突变动物模型构建领域，具体是一种Slc26a4基因L236P突变小鼠模型的建立方法。

背景技术

小鼠的品种和品系很多，是实验动物中培育品系最多的动物。世界上常用的近交品系小鼠约有250多个，均具有不同特征。突变品系小鼠约有350多个。以色而论，有白色、灰色、棕色、黄色、黑色等。如野生毛色小鼠有C3H、CBA/N等；黑色小鼠有C57BL/6、C57BL/10、C58品系等；灰色小鼠有C57L、DBA/2品系等；白色小鼠有A、AKR、BALB/c、RF、SWR等品系。

为研究各种人类疾病需要培育的品系也很多，如研究心血管疾病的小鼠：DBA等品系；自家免疫性疾病小鼠：NZB/N、NZB×NZW等品系；脑积水病小鼠：C57BL/KaLwN、B10、D2/nSnN等品系；肾盂积水小鼠：C57L/N、STR/N等品系；白内障小鼠L：STAR/N等品系；多尿症小鼠：STR/N、STR/lN等品系；肾脏病A/HeN等品系；腭裂小鼠：A/HeN(自发)、C57BL/6N（诱发）等品系；放射病C57BR/CdJN(有抗力)、BALB/CAnN、LACA（敏感）等品系；毒浆原虫病小鼠：BALB/CAnN等品系；疟疾小鼠：C58/LWN、DBA/1JN（对疟原虫感染有抗力）、C57L/N（疟原虫易感）等品系。

Slc26a4基因定位在7q31，含有21个外显子，DNA序列长达41kb，其中第一个外显子在翻译过程中不参与编码。Slc26a4基因的转录物约为5kb。该基因编码780个氨基酸，所编码的蛋白是一个多重跨膜的蛋白，被称为pendrin。pendrin被推测含有11个跨膜结构域，并且定位在细胞膜上。该蛋白的功能是对氯离子和碳酸氢根离子进行离子交换。pendrin在内耳和甲状腺中表达量较高，此外，该蛋白还在肾脏、乳腺、睾丸、胎盘和子宫中被发现。并且在胎儿和成人大脑中没有发现。曾有报道Slc26a4基因编码的蛋白pendrin的功能是硫酸盐转运蛋白，但是没有确切的证据。随后Scott报道pendrin的功能是氯离子和碘离子转运蛋白，而不是硫酸盐转运蛋白，他的团队随后证明pendrin在甲状腺的顶端膜表达，提出了甲状腺中pendrin功能的模型，其功能是将将碘化物穿过甲状腺的顶端膜运输到胶体空间中。由于pendrin蛋白在内耳中的表达范围非常广泛，该蛋白被认为对内淋巴液的重吸收非常总要。

SLC26A4基因的突变常常导致病人出现Pendred综合征和前庭导水管扩大综合征，为常染色体隐性遗传病，主要表现为感音神经性耳聋并伴随内耳畸形，有的还会出现眩晕，耳聋的程度因人而异，有的比较严重，有的比较轻微。为了探究该基因的致病机制，已经有很多文献对该基因进行了报道。有一篇文献报道在Slc26a4基因敲除小鼠模型中，小鼠听力完全丧失，多数小鼠有严重的平衡障碍。但是这些表型并不能模拟在人类患者中表现出的更加轻微的听觉和平衡的表型。

发明内容

本发明的目的在于提供制作一个能够模拟人类疾病的小鼠模型，通过对小鼠模型的分析研究，探究该基因的致病机制，为临床提供可靠的实验数据。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：