[发明专利]用于检测碳青霉烯类耐药基因NDM1-24亚型的LAMP引物组合及其应用在审
| 申请号： | 201811540106.5 | 申请日： | 2018-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN109628616A | 公开（公告）日： | 2019-04-16 |
| 发明（设计）人： | 张岩;陈燕旌;邢婉丽;高占成;程京 | 申请（专利权）人： | 博奥生物集团有限公司;北京大学人民医院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京开阳星知识产权代理事务所(普通合伙) 11710 | 代理人： | 姚金金 |
| 地址： | 102206 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 耐药基因 碳青霉烯 环引物 内引物 外引物 亚型 检测 生物技术领域 核苷酸序列 报告结果 实时观测 实时检测 特异性强 样品处理 组合检测 灵敏度 准确率 应用 筛选 | ||
1.用于检测碳青霉烯类耐药基因NDM1-24亚型的LAMP引物组合，其特征在于，所述引物组合由外引物-F3、外引物-B3、内引物-FIP、内引物-BIP、环引物-LF和环引物-LB组成，
所述外引物-F3为如下(a1)或(a2)：
(a1)如SEQ ID NO.1所示的单链DNA分子；
(a2)含有(a1)的DNA分子；
所述外引物-B3为如下(a3)或(a4)：
(a3)如SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子；
(a4)含有(a3)的DNA分子；
所述内引物-FIP为如下(a5)或(a6)：
(a5)如SEQ ID NO.3所示的单链DNA分子；
(a6)含有(a5)的DNA分子；
所述内引物-BIP为如下(a7)或(a8)：
(a7)如SEQ ID NO.4所示的单链DNA分子；
(a8)含有(a7)的DNA分子；
所述环引物-LF为如下(a9)或(a10)：
(a9)如SEQ ID NO.5所示的单链DNA分子；
(a10)含有(a9)的DNA分子；
所述环引物-LB为如下(a11)或(a12)：
(a11)如SEQ ID NO.6所示的单链DNA分子；
(a12)含有(a11)的DNA分子。
2.含有权利要求1所述的引物组合的试剂或试剂盒。
3.根据权利要求2所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述引物组合中，外引物-F3、外引物-B3、内引物-FIP、内引物-BIP、环引物-LF和环引物-LB的摩尔比为0.3：0.3：2.4：2.4：1：1。
4.根据权利要求3所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述引物组合中的各条引物单独包装。
5.根据权利要求2～4任一项所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒的用途包括但不限于：
(1)鉴定碳青霉烯类耐药基因NDM；
(2)用于检测待测样本中是否含有碳青霉烯类耐药基因NDM；
(3)用于检测待测微生物是否为碳青霉烯类耐药微生物。
6.权利要求1所述的引物组合在检测待测样本中是否含有碳青霉烯类耐药基因NDM中的应用。
7.一种检测待测样本中是否含有碳青霉烯类耐药基因NDM的方法，包括如下步骤：
(1)提取待测样本的总DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述的引物组合进行环介导等温扩增，根据扩增结果判断待测样本中是否含有碳青霉烯类耐药基因NDM。
8.权利要求1所述的引物组合在检测待测微生物是否为碳青霉烯类耐药微生物中的应用。
9.一种检测待测微生物是否为碳青霉烯类耐药微生物的方法，包括如下步骤：
(1)提取待测微生物的基因组DNA；
(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述的引物组合进行环介导等温扩增，根据扩增结果判断待测微生物是否为碳青霉烯类耐药微生物。
10.根据权利要求7或9所述的方法，其特征在于，所述环介导等温扩增的反应条件为65℃恒温50min。
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