[发明专利]一种米酵菌酸的检测方法

说明书

本发明公开了一种米酵菌酸的检测方法，本发明利用氨水甲醇溶液加氯化钠处理粉碎后的样品，震荡超声分液后加入碳酸氢钠溶液分离，加入石油醚分离后浓缩，最后用甲醇溶解后在紫外分光光度计上比色进行测定。本发明操作步骤简单方便，快速、准确、灵敏，可同时对样品进行批量检测，并且还扩展了国标检测的检测范围，为保障食品安全发挥积极作用。

技术领域

本发明属于检测技术领域，尤其涉及一种米酵菌酸的检测方法。

背景技术

米酵菌酸是椰毒假单胞菌产生的一种毒素，为脂溶性酸性化合物，分子式C₂₈H₃₈O₇,相对分子量为486.6，耐热，在酸性条件、氧化剂及日照等条件下不稳定。常见的污染食品主要为谷类发酵制品、薯类制品及银耳等，食用受其污染的食物会引发中毒，严重可致死亡。动物实验标明，米酵菌酸主要作用于肾脏、肝脏及大脑等器官，且细胞内的线粒体毒物如氰化物或2，4-二硝基苯，具有更强的致死性。除了对于细胞内线粒体的毒性外，米酵菌酸还可以使部分巯基酶失活。但也有研究标明米酵菌酸在生化和药理学方面具有一定的生物活性和研究价值，从20世纪30年代起，研究人员从引起人中毒的椰子发酵食品样品中提取出该毒素，并对该毒素的理化性质和致毒机制进行了大量研究，近年来米酵菌酸又作为研究抗肿瘤疾病和细胞凋亡的一种工具试剂来使用。

目前，我国关于米酵菌酸测定的国家标准GB/T5009.189-2003《银耳中米酵菌酸的测定》中采用液液萃取-薄层色谱和液液萃取-液相色谱的检测方法，仅适用于银耳样品中米酵菌酸的测定，且存在前处理复杂，干扰多，不适用于批量样品的检测分析等问题。

发明内容：

本发明的第一个目的是：提供一种操作步骤简单方便、可对样品进行批量检测的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种米酵菌酸的检测方法，包括以下步骤：

a.样品前处理：准确称取经过粉碎、过40目筛的待检测样品30.0g，加入100mL2.0％氨水甲醇溶液，再加入0.5g氯化钠，震荡2min，密闭避光振荡30min，再超声5min后过滤；收集滤液于分液漏斗中，加入50ml碳酸氢钠溶液，震荡2min，静置分层，取上层清液于另一分液漏斗中，再加10ml碳酸氢钠溶液重复萃取两次，合并碳酸氢钠水层于分液漏斗中；用6mol/L盐酸调至该分液漏斗中溶液的pH值为2～3后，加入石油醚50ml，震荡2min，静置分层，收集石油醚层溶液，重复3次，合并石油醚层溶液于浓缩瓶中，于50℃水浴氮气吹干；加5ml甲醇将干物质溶解，混匀，取上清液经离心后，得到待测样品；

b.检测：利用比色皿，在分光光度计中测定溶液的吸光值；

c.计算：根据计算公式得到样品中米酵菌酸的含量。

优选的，所述的步骤a中的震荡处理为涡旋振荡处理。

优选的，所述的步骤b中分光光度计为紫外分光光度计。

优选的，所述的步骤b中是利用10mm石英比色皿，在波长265.5nm处测定溶液的吸光值。

优选的，所述的步骤c中计算公式为：

其中，x为样品中米酵菌酸含量(mg/kg)；c为由工作曲线上查出的试样测定液中相当于米酵菌酸的含量(ug/ml)；v为加入甲醇试剂的体积(ml)；m为甲醇溶解时相当试样的质量(g)。

由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

1、本方法应用紫外分光光度计测定结果与国标中应用高压液相色谱法相比，不存在显著差异，二者数据之间的精密度较好，紫外分光光度法仪器成本低，操作步骤简单方便。