[发明专利]一种可对脑膜炎类型进行初筛的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种可对脑膜炎类型进行初筛的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法，可对脑膜炎类型进行初筛的时间分辨荧光免疫层析试纸条包括：样品结合垫、检测垫、吸样垫和底板，样品结合垫、检测垫和吸样垫依次设置在底板上，且样品结合垫和吸样垫分别叠压在检测垫的两端上，检测垫上设有四条检测线和一条质控线。本发明所需样本量少，灵敏度高，检测背景信号低，特异性强，线性范围宽，操作简便，结果可靠；进一步，通过同时检测脑脊液中PCT、CRP、ESAT～6～CFP10抗原及隐球菌荚膜多糖抗原的含量，能够对脑膜炎的类型有一个大致的判断，可有效减小临床诊断时因经验主义出现误诊的可能性，为脑膜炎类型的确诊提供了较为准确的免疫学依据。

技术领域

本发明涉及一种可对脑膜炎类型进行初筛的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

中枢神经系统感染是儿科常见病和多发病，以细菌性脑膜炎和病毒性脑膜炎最为多见。近年来，随着结核杆菌的基因突变、抗结核药物研制相对滞后和AIDS病患者的增多，国内外结核病的发病率及病死率逐渐增高。同时，随着抗生素、免疫抑制剂和皮质激素的广泛应用，机体菌群失调或免疫功能下降，使得隐球菌性脑膜炎的发病率也明显升高。由于这几种脑膜炎表现出来的病症有着相似性，尤其是结核性脑膜炎和隐球菌性脑膜炎在临床上表现酷似，容易误诊，病患得不到及时的有效治疗从而丧命。因此急需寻找一种能早期诊断及鉴别脑膜炎病因的方法，对治疗、预后、转归、减少患者出现后遗症将有极大的临床意义。

众多研究表明，在细菌性和病毒性脑膜炎患者中，脑脊液中PCT和CRP的水平均显著高于健康儿童，这说明脑脊液中PCT和CRP可以作为儿童病毒性和细菌性脑膜炎临床诊断的指标。由于感染结核分枝杆菌(MTU)体内首先出现结核抗原，而结核抗体则要感染后8周起逐渐产生，因此检测脑脊液中的MTU分泌特异性抗原可作为快速诊断脑膜活动性结核的有效途径。在感染早期，致病型结核分枝杆菌一般会分泌大量的特异性蛋白，即6000～早期分泌性抗原靶(ESAT～6)与抗原培养滤液蛋白10(CFP10)，并且这两种蛋白不存在卡介苗BCG中，故其可以作为活动性结核的标志物。对于隐球菌性脑膜炎，国内多采用脑脊液图片、阿利新蓝染色、墨汁染色和真菌培养等方法，虽然真菌培养是确诊隐脑的金标准，但耗时较长，需2～5d，有的真菌需要10d，培养阳性率低；涂片和墨汁染色阳性率较高，尤其是对脑脊液离心后镜检，可提高阳性率，但仍然存在漏检和误诊的情况，造成患者不能及时治疗。

发明内容

本发明提供一种可对脑膜炎类型进行初筛的时间分辨荧光免疫层析试纸条及其制备方法，本发明试纸条通过免疫层析法，配合使用荧光免疫分析仪，可以方便、准确且高灵敏度地同时检测出脑脊液中PCT、CRP、ESAT～6～CFP10抗原、隐球菌荚膜多糖抗原的含量，为脑膜炎类型的初判提供一定的理论依据。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种可对脑膜炎类型进行初筛的时间分辨荧光免疫层析试纸条，包括：样品结合垫、检测垫、吸样垫和底板，样品结合垫、检测垫和吸样垫依次设置在底板上，且样品结合垫和吸样垫分别叠压在检测垫的两端上，检测垫上设有四条检测线和一条质控线。

上述试纸条的检测指标包括脑脊液中PCT、CRP、ESAT～6～CFP10抗原和隐球菌荚膜多糖抗原；样品结合垫内包被有时间分辨荧光微球标记的抗体，时间分辨荧光微球标记的抗体为检测指标的抗体。

为了提高检测的准确性，样品结合垫上包被有时间分辨荧光微球标记的抗PCT单克隆抗体、抗CRP单克隆抗体、抗ESAT～6～CFP10多克隆抗体和抗隐球菌荚膜多糖单克隆抗体。

为了方便制造，并保证检测的准确性，时间分辨荧光微球为修饰过的聚苯乙烯微球；聚苯乙烯微球表面修饰官能团为羧基、羟基或环氧基的一种，聚苯乙烯微球的粒径为100～500nm，优选为180～300nm。