[发明专利]一种检测葡萄糖-6-磷酸异构酶的试剂盒及试剂盒的使用方法

说明书

本发明提供了一种检测葡萄糖‑6‑磷酸异构酶的试剂盒及试剂盒的使用方法，属于酶检测技术领域，试剂盒中包括试剂1和试剂2，试剂1以Tris缓冲液为溶剂包括三磷酸腺苷、氧化型辅酶Ⅰ、保护剂和防腐剂；试剂2以Tris缓冲液为溶剂包括氯化镁、果糖‑6‑磷酸、葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶、稳定剂和防腐剂；Tris缓冲液的浓度为50～500mmol/L。采用本发明提供的试剂盒在6min20s～9min40s能够得到检测葡萄糖‑6‑磷酸异构酶的结果，缩短了检测时间。

技术领域

本发明涉及酶检测技术领域，具体涉及一种检测葡萄糖-6-磷酸异构酶的试剂盒及试剂盒的使用方法。

背景技术

葡萄糖-6-磷酸异构酶(Glucose-6-phosphate isomerase,GPI；EC 5.3.1.9)是一类具有多功能生物活性的天然蛋白质，它参与糖代谢的磷酸戊糖途径和糖酵解作用，催化葡萄糖6-磷酸(glucose 6-phosphate,G 6-P)和果糖-6-磷酸(fructose-6-phosphate,F-6-P)的相互转化，从而催化F-6-P异构化为G 6-P。PGI具有多种功能：在细胞内，PGI在糖酵解和糖异生中其关键作用；在细胞外，PGI(又称为自分泌运动因子，Autocrine MotilityFactor(AMF))作为细胞因子，刺激细胞运动，并与肿瘤的发生和转移相关。

现有技术中，主要是Elisa抗原抗体检测葡萄糖6磷酸异构酶的含量，采用免疫标记吸附技术抗原抗体结合反应原理制成的诊断试剂盒，但是该试剂盒需要复杂的程序操作，如抗体的制备，抗体的标记，包被抗体聚苯乙烯微孔板的制备，得到检测结果需要较长的时间。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测葡萄糖-6-磷酸异构酶的试剂盒，采用本发明提供的试剂盒在6min20s～9min40s能够得知结果，缩短了检测时间。

本发明提供了一种检测葡萄糖-6-磷酸异构酶的试剂盒，所述试剂盒中包括试剂1和试剂2，

所述试剂1以Tris缓冲液为溶剂，每升包括0.5～5mmol三磷酸腺苷、1～10mmol氧化型辅酶Ⅰ、0.5～20g保护剂和0.5～5g防腐剂；

所述试剂2以Tris缓冲液为溶剂，每升包括1～10mmol氯化镁、50～500mmol果糖-6-磷酸、1～50KU葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、5～50g稳定剂和0.5～5g防腐剂；

所述Tris缓冲液的浓度为50～500mmol/L。

优选的，所述试剂1的pH值为7.5～9。

优选的，所述试剂2的pH值为7.5～9。

优选的，所述保护剂包括聚氧乙烯十二烷基醚、聚乙二醇对异辛基苯基醚、聚乙二醇单月桂酸酯、4-壬基苯基-聚乙二醇、烷基聚烯烃基乙二醇醚和烷基聚乙烯乙二醇醚中的一种或多种。

优选的，所述防腐剂包括山梨酸钾、亚硝酸钠、叠氮钠、PC300和苯甲酸钠中的一种或多种。

优选的，所述稳定剂包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鳌合剂EDTA类、聚乙二醇、二糖类、多元醇和双甘肽中的一种或多种。

优选的，所述二糖类包括山梨醇、甘露醇、蔗糖或海藻糖。

优选的，所述多元醇包括乙二醇、丙三醇或丙二醇。

本发明还提供了上述技术方案所述的试剂盒的使用方法，包括：

将样品与试剂1混合后在35～42℃下孵育3～5min，得到第一孵育物；所述样品与试剂1的体积比为(1～5):(220～260)；

将所述第一孵育物与试剂2混合后在35～42℃下孵育50～70s，得到第二孵育物；所述试剂2与样品的体积比为(50～70):(1～5)；