[发明专利]一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法

权利要求书

1.一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)雄蕊套袋：选择健康无病害的红千叶荷花植株，在花朵开放前1～2天，扒开花蕾，用无菌镊子除去花粉后，然后用硫酸纸袋将其蕾花进行套袋隔离；

(2)花粉收集：选择健康无病害的埃及蓝睡莲植株，在花朵开放前1～2天，用硫酸纸袋将其蕾花进行套袋隔离，在授粉当天早晨7：00～9：00之间，拿掉硫酸纸袋，用无菌镊子将其雄蕊的花粉夹出，放在纸盒中收集好，用于授粉；

(3)人工授粉：在步骤(1)的红千叶荷花花朵开放的第一天，扒开花蕾，用镊子将步骤(2)收集的花粉直接涂布到红千叶荷花的柱头上，0～2h之间用无菌棉花吸取营养液，将棉花上的营养液均匀涂抹到红千叶荷花的柱头上，5～10s后重复涂抹营养液一次，并用吸取了营养液的棉花包裹柱头，重新套上硫酸纸袋，授粉完成；

(4)染色体加倍：授粉11～13h后，拿掉硫酸纸袋，2～3天后，用解剖刀将莲蓬孔洞内生的小果的顶部表皮刮破，在小果顶部垂直向下1/3～2/3处，找到胚珠，用无菌针刺穿胚珠壁后，将吸取了20～30μl染色体加倍液的无菌棉花塞入胚珠中，继续管理至种子成熟，收获的种子采用流式细胞仪检测其倍性。

2.根据权利要求1所述的一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述收集的花粉为花粉囊开裂且花粉粒散出的花粉。

3.根据权利要求1所述的一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法，其特征在于，所述步骤(2)收集的花粉在30min之内用于步骤(3)的人工授粉。

4.根据权利要求1所述的一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述营养液主要包括如下成分：黄豆粉6～10g/L、牡蛎精粉2～5g/L、白糖20～30g/L、6-苄氨基腺嘌呤12～15mg/L和赤霉素5～10mg/L。

5.根据权利要求1所述的一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述无菌棉花吸取营养液的体积为10～20μl。

6.根据权利要求1所述的一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述染色体加倍液主要包括如下成分：甲基胺草磷1.5～3mg/L、氨磺灵69～104mg/L和2,4-二氯苯氧乙酸15～25mg/L。