[发明专利]一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法

说明书

本发明涉及一种植物育种技术，特别涉及一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法，本申请以红千叶荷花交种为母本，以埃及蓝睡莲杂为父本，通过杂交技术以及营养液处理获得单倍体，并经染色体加倍液处理，获得双单倍体荷花植株。该方法简单易学，所用试剂低浓度、低毒性、低成本，获得的红千叶荷花双单倍体诱导效率为10.3％～11.0％。菠菜:它富含类胡萝卜素、维生素C、维生素K、矿物质(钙质、铁质等)、辅酶Q10等多种营养素核桃中的磷脂，对脑神经有良好保健作用。核桃油含有不饱和脂肪酸，有防治动脉硬化的功效。核桃仁中含有锌、锰、铬等人体不可缺少的微量元素。牡蛎精粉富含牛磺酸、糖原及海洋生物特有的生理活性物质、人体必需的氨基酸，丰富而比例适当的锌、铁、铜、碘、硒等对人体有益的微量元素。牡蛎精粉2～5g/L。

【技术领域】

本发明涉及植物育种技术领域，特别涉及一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法。

【背景技术】

睡莲类植物是睡莲等一类水生高等植物的统称，它们广泛分布于世界温带、亚热带和热带地区。睡莲类植物作为园艺观赏花卉和水生蔬菜品种，具有重要的经济价值。其中，最为著名的有亚洲莲(荷花)、美洲黄莲、中华萍蓬草、芡实、莼菜以及各种各样的睡莲品种。此外，亚洲莲的果实(莲子)、根状茎(藕)、叶(荷叶)、花(荷花)以及芡实果实等均可作为药材。睡莲类植物也具有重要的文化价值。古今中外常有文人墨客以莲和睡莲等为题材，留下了千古吟诵的诗文和价值连城的世界名画。

人们对睡莲类植物已有长期的利用和栽培历史，目前已在世界各国培育出大量的园艺观赏和水生蔬菜品种。我国于20世纪80年代开始荷花的育种工作,经过20多年的努力,目前荷花品种已多达数百个。但耐水深、开花繁茂的大株型品种,以及花期长、适合作切花的品种和耐荫性小型碗莲品种等均缺乏,难以满足消费者的不同需求。目前荷花的育种方法包括芽变选种、倍性育种图、理化诱变育种因、太空诱变等,但传统的杂交育种仍是最主要途径之一。然而，常规育种方法周期长，工作量大，育成一个品种往往需要6-8年甚至更长的时间。而由于市场需求、病害以及生产环境等的不断变化，通过较长时间选育出的品种，已经不能够满足现实消费和生产的需要。因此，加快睡莲类新品种的选育进程、缩短育种时间是睡莲类植物育种技术和方法上要突破的重点之一。

双单倍体育种(haploid breeding)是一种快速、高效、安全的育种新技术，主要有4大突出优点：快速稳定，可使任意育种后代材料1年纯合稳定；应用范围广，DH育种技术可与所有育种方法任意结合；大幅减少对育种经验的依赖；加速突破性优异种质创新。双单倍体植株通常利用植物组织培养技术(如花药离体培养等)诱导产生单倍体植株，再通过某种手段使染色体组加倍(如用秋水仙素处理)，从而使植物恢复正常染色体数。双单倍体育种在某些观赏植物上已有显著效果，然而在睡莲科植物的双单倍体育种的研究却未见有过报道。

【发明内容】

本发明针对上述的问题，本发明提供了一种红千叶荷花×埃及蓝睡莲育成双单倍体的方法，以红千叶荷花为母本，埃及蓝睡莲为父本，通过杂交技术以及营养液处理获得单倍体，并经染色体加倍液进行加倍，获得双单倍体荷花植株，该方法为实际应用提供了较大价值。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

(1)雄蕊套袋：选择健康无病害的红千叶荷花植株，在花朵开放前1～2天，扒开花蕾，用无菌镊子除去花粉后，然后用硫酸纸袋将其蕾花进行套袋隔离；

(2)花粉收集：选择健康无病害的埃及蓝睡莲植株，在花朵开放前1～2天，用硫酸纸袋将其蕾花进行套袋隔离，在授粉当天早晨7：00～9：00之间，拿掉硫酸纸袋，用无菌镊子将其雄蕊的花粉夹出，放在纸盒中收集好，用于授粉；

(3)人工授粉：在步骤(1)的红千叶荷花花朵开放的第一天，扒开花蕾，用镊子将步骤(2)收集的花粉直接涂布到红千叶荷花的柱头上，0～2h之间用无菌棉花吸取营养液，将棉花上的营养液均匀涂抹到红千叶荷花的柱头上，5～10s后重复涂抹营养液一次，并用吸取了营养液的棉花包裹柱头，重新套上硫酸纸袋，授粉完成；