[发明专利]一种三色凤尾蕨组培方法及其在种质保存中的应用

权利要求书

1.一种三色凤尾蕨的组培方法，其特征在于，以孢子为外植体，包括以下步骤：

1)将所述外植体接种于萌发培养基进行萌发培养，得萌发苗；所述萌发培养基包括萌发培养基S1和萌发培养基S2，所述萌发培养基S1由1/2MS培养基、20g/L蔗糖和5.6g/L琼脂组成；所述萌发培养基S2由1/2MS培养基、0.5mg/LNAA、20g/L蔗糖和5.6g/L琼脂组成；所述萌发培养基的pH值均为5.5～6.5；

所述萌发培养包括将所述外植体接种于所述萌发培养基S1中15d后，将萌发的孢子接种于所述萌发培养基S2中；

2)将步骤1)所述萌发苗的茎尖组织接种于诱导增殖培养基进行诱导增殖培养，得绿色小球；所述诱导增殖培养基由MS培养基，2mg/L KT，1mg/L 2,4-D，20g/L蔗糖和5.6g/L琼脂组成，所述诱导增殖培养基的pH值为5.5～6.5；

3)将步骤2)所述绿色小球接种于分化生根培养基进行分化生根培养，得生根组培苗；所述分化生根培养基由1/2MS培养基，0.1mg/L IBA，0.1mg/L IAA，20g/L蔗糖和5.6g/L琼脂组成，pH值为5.5～6.5；

步骤1)所述萌发培养，步骤2)所述诱导增殖培养以及步骤3)所述分化生根培养的温度均为23±2℃，光照强度均为10～20μmol/(m²·s)，光照时间均为10～14h/d。

2.根据权利要求1所述组培方法，其特征在于，步骤1)所述接种前，还包括将孢子置于无菌水中浸泡4～8h后消毒。

3.根据权利要求2所述组培方法，其特征在于，所述消毒包括：将浸泡后的孢子用体积分数为75％的乙醇溶液消毒5～7s，用无菌水冲洗2～5遍，用质量浓度为0.1％的HgCl₂溶液消毒5～10min，用无菌水水洗3～8遍。

4.根据权利要求1所述组培方法，其特征在于，步骤3)得所述生根组培苗后，还包括炼苗和移栽。

5.根据权利要求4所述组培方法，其特征在于，所述炼苗的时间为3～4d。

6.根据权利要求4所述组培方法，其特征在于，所述移栽的基质包括：腐殖土和沙土，所述腐殖土和沙土的体积比为(1.5～2.6)：1。