[发明专利]一种三色凤尾蕨组培方法及其在种质保存中的应用

说明书

本发明提供了一种三色凤尾蕨组培方法及其在种质资源的保存中的应用，涉及植物组培技术领域。本发明所述方法以孢子为外植体，包括以下步骤：1)将所述外植体接种于萌发培养基进行萌发培养，得萌发苗；2)将所述萌发苗接种于诱导增殖培养基进行诱导增殖培养，得绿色小球；3)将所述绿色小球接种于分化生根培养基进行分化生根培养，得生根组培苗。本发明经过160d左右可得到大量生根的三色凤尾蕨组培苗；利用本发明所述方法，增殖率达1:10，生根率为90％以上，移栽成苗率80％以上；且将增殖得到的绿色小球进行离体保存，继代周期可延长至1.5年以上。

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种三色凤尾蕨组培方法及其在种质保存中的应用。

背景技术

三色凤尾蕨(Pteris tricolor)为凤尾蕨科凤尾蕨属植物，其叶柄、裂片边缘呈紫色，羽片中央具白色和玫瑰红色的宽带，从而使叶片整体形成白、红、绿的三色条纹，故此得名。三色凤尾蕨株形优美，叶片色彩斑斓，具有极高的观赏价值，是一种稀有的观赏植物。目前，三色凤尾蕨在国内仅分布于云南南部偏热带的地区，生境狭窄。

凤尾蕨属的很多物种都为观赏植物，被广泛应用于园林园艺、植物造景等，该属的很多物种已经有了孢子无菌萌发、绿色小球(GGB)诱导和植株再生等方面的报道，如白玉凤尾蕨、银中斑凤尾蕨和大叶凤尾蕨等，但三色凤尾蕨的组织培养与快速繁殖鲜有报道或方案不明确，至今市场上也未见该种商品的大量出售。目前的零星市售植株主要来源于野生个体，导致这一稀有物种更加珍稀。为缓解人们对三色凤尾蕨日益增长的审美需求与野生资源日渐枯竭的矛盾，对其开展组培快繁并结合种质资源保存的工作已迫在眉睫。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种三色凤尾蕨组培方法及其在种质保存中的应用，两个月内增殖系数高达1：10以上，满足工厂化育苗的要求，同时离体保存继代周期达1.5年以上，实现该珍稀物种的离体保存。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种三色凤尾蕨的组培方法，以孢子为外植体，包括以下步骤：

1)将所述外植体接种于萌发培养基进行萌发培养，得萌发苗；所述萌发培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括：0～0.5mg/L的NAA，15～25g/L的蔗糖和5～6.2g/L的琼脂，所述萌发培养基的pH值为5.5～6.5；

2)将步骤1)所述萌发苗接种于诱导增殖培养基进行诱导增殖培养，得绿色小球；所述诱导增殖培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：1.5～2.4mg/L的KT，0.6～1.5mg/L的2,4-D，15～25g/L的蔗糖和5～6.2g/L的琼脂，所述诱导增殖培养基的pH值为5.5～6.5；

3)将步骤2)所述绿色小球接种于分化生根培养基进行分化生根培养，得生根组培苗；所述分化生根培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括0.6～1.5mg/L的IBA，0.06～0.15mg/L的IAA，15～25g/L的蔗糖和5～6.2g/L的琼脂，pH值为5.5～6.5。

优选的，步骤1)所述接种前，还包括将孢子置于无菌水中浸泡4～8h后消毒。

优选的，所述消毒包括：将浸泡后的孢子用体积分数为75％的乙醇溶液消毒5～7s，用无菌水冲洗2～5遍，用质量浓度为0.1％的HgCl₂溶液消毒5～10min，用无菌水水洗3～8遍。

优选的，步骤1)所述萌发培养，步骤2)所述诱导增殖培养以及步骤3)所述分化生根培养的温度独立的为23±2℃，光照强度独立的为10～20μmol/(m²·s)，光照时间独立的为10～14h/d。

优选的，步骤2)所述接种前，还包括将所述萌发苗分解为根、叶柄、叶片和茎尖组织。

优选的，步骤3)得所述生根组培苗后，还包括炼苗和移栽。