[发明专利]一种检测赭曲霉毒素A的荧光生物传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测赭曲霉毒素A的荧光生物传感器，其特征在于，包括OTA适配体、目标物、复合探针I、复合探针II、HP2、HP3、phi29 DNA 聚合酶、核酸内切酶IV、dNTP以及缓冲液；

所述复合探针I为OTA适配体、拱形探针与环形模板杂交而成；

所述复合探针II为环形模板与HP1杂交而成；

所述的环形模板探针由挂锁探针与连接探针形成；

所述的挂锁探针序列如SEQ No.1所示；

所述的连接探针序列如SEQ No.2所示；

所述的OTA适配体序列如SEQ No.3所示；

所述的拱形探针序列如SEQ No.4所示

所述的HP1序列如SEQ No.5所示；

所述的HP2序列如SEQ No.6所示；

所述的HP3序列如SEQ No.7所示。

2.根据权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述的挂锁探针的5'端磷酸化。

3.根据权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述的环形模板探针的制备工艺为：

S1 挂锁探针、连接探针在10×T4 DNA连接酶反应缓冲液中变性；所述的缓冲液为50mM Tris-HCl，10 mM MgCl₂，10 mM DTT，1 mM OTA，pH7.5；

S2加入3 μL 400 U/μL T4 DNA连接酶，并在20 ℃孵育2 h；

S3在65 ℃热处理10分钟使T4 DNA连接酶失活，同时使连接反应液终止；

S4加入核酸外切酶Ⅰ、核酸外切酶Ⅲ，在37 ℃水浴反应1 h，然后热处理使外切酶失活，4 ℃保存待用。

4.根据权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述复合探针I的制备工艺为：将灭菌水、环形模板、 拱形探针、OTA适配体、PBS缓冲液，在37℃孵育，使环形模板与探针链充分杂交，制备成复合探针I。

5.根据权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述复合探针II的制备工艺为：环形模板、HP1、PBS缓冲液，在37℃孵育，使环形模板与探针链充分杂交，制备成复合探针II。

6.一种权利要求1-5任一所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）NMM溶液配制；所述的NMM为N-methyl mesoporphyrin IX的缩写，称取NMM粉末0.0009 g，溶于90 μL二甲基亚砜中，于-20 ℃保存；

（2）将目标物与复合探针I、复合探针II、HP2、HP3、NMM溶液、phi29 DNA 聚合酶、核酸内切酶IV、dNTP加入缓冲液中，混合均匀；37 ℃，孵育120 min；

（3）荧光检测；激发波长设置为399 nm，发射波长为610 nm，检测范围560 nm-640 nm，读取荧光信号变化。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）的缓冲液为50 mMTris-HCl, 10 mM MgCl₂, 10 mM (NH₄)₂SO₄, 4 mM DTT, pH 7.5。

8.一种权利要求1所述的荧光生物传感器在检测农作物生产、加工、储存过程中的赭曲霉毒素A上的应用。