[发明专利]一种植物多分体病毒载体的开发和应用

权利要求书

1.一种成套重组病毒载体，包括表达BN1的重组载体和表达BN2的重组载体；

所述表达BN1的重组载体为将BNYVV基因组的RNA1全长CDNA序列替换双元表达载体的多克隆位点间的DNA片段得到的载体，表达BNYVV病毒的RNA1；

所述表达BN2的重组载体为将BNYVV基因组的RNA2全长CDNA序列替换所述双元表达载体的多克隆位点间的DNA片段得到的载体，表达BNYVV病毒的RNA2。

2.一种成套重组病毒载体，包括表达BN1的重组载体、表达BN2的重组载体，和，如下三种至少一种：表达BN3的重组载体、表达BN4的重组载体和表达BN5的重组载体：

所述表达BN1的重组载体为将BNYVV基因组的RNA1全长CDNA序列替换双元表达载体的多克隆位点间的DNA片段得到的载体，表达BNYVV病毒的RNA1；

所述表达BN2的重组载体为将BNYVV基因组的RNA2全长CDNA序列替换所述双元表达载体的多克隆位点间的DNA片段得到的载体，表达BNYVV病毒的RNA2；

所述表达BN3的重组载体为将BNYVV基因组的RNA3全长CDNA序列替换所述双元表达载体的多克隆位点间的DNA片段得到的载体，表达BNYVV病毒的RNA3；

所述表达BN4的重组载体为将BNYVV基因组的RNA4全长CDNA序列替换所述双元表达载体的多克隆位点间的DNA片段得到的载体，表达BNYVV病毒的RNA4；

所述表达BN5的重组载体为将BNYVV基因组的RNA5全长CDNA序列替换所述双元表达载体的多克隆位点间的DNA片段得到的载体，表达BNYVV病毒的RNA5。

3.根据权利要求1或2所述的重组载体，其特征在于：

所述双元表达载体为植物双元表达载体；

和/或，所述植物双元表达载体具体为pCB301-2x35S-MCS-HDV_RZ-NOS；

所述多克隆位点为StuI和SmaI识别位点。

4.权利要求1-3中任一所述重组病毒载体在制备植物表达目的核酸的多分体病毒载体系统中的应用。

5.一种植物表达目的核酸的多分体病毒载体系统，包括权利要求1-3中任一中所述表达BN1的重组载体和表达目的核酸和BN2的重组载体；

所述表达目的核酸和BN2的重组载体按照包括如下步骤的方法制备：将权利要求1中所述表达BN2的重组载体中的RNA2全长CDNA序列第1565-1872位核苷酸替换为目的核酸，且其他核苷酸不变，得到的载体。

6.一种植物表达目的核酸的多分体病毒载体系统，包括权利要求1-3中任一中所述表达BN1的重组载体、权利要求1-3中任一中所述表达BN2的重组载体，和，如下三种至少一种：表达目的核酸和BN3的重组载体、表达目的核酸和BN4的重组载体以及表达目的核酸和BN5的重组载体；

所述表达目的核酸和BN3的重组载体按照包括如下步骤的方法制备：将权利要求1中所述表达BN3的重组载体中RNA3全长CDNA序列上的p25蛋白编码基因替换为目的核酸，得到的载体；

所述表达目的核酸和BN4的重组载体按照包括如下步骤的方法制备：将权利要求1中所述表达BN4的重组载体中RNA4全长CDNA序列上的p31蛋白编码基因去除终止密码子，且在去除终止密码子p31蛋白编码基因的3'末端融合和目的核酸，得到的载体；

所述表达目的核酸和BN5的重组载体按照包括如下步骤的方法制备：将权利要求1中所述表达BN4的重组载体中RNA5全长CDNA序列上的p26蛋白编码基因去除终止密码子，且在去除终止密码子p26蛋白编码基因的3'末端融合和目的核酸，得到的载体。

7.根据权利要求5或6所述的系统，其特征在于：所述目的核酸为目的基因或gRNA；

和/或，所述表达目的核酸和BN3的重组载体、所述表达目的核酸和BN4的重组载体以及所述表达目的核酸和BN5的重组载体中的目的核酸相同或不同。