[发明专利]一种牛丝氨酸苏氨酸激酶STK11干扰腺病毒的构建方法在审
| 申请号： | 201811547742.0 | 申请日： | 2018-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN109593785A | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 王力;昝林森;成功;张松 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/113 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 腺病毒 丝氨酸苏氨酸激酶 构建 侵染 前脂肪细胞 腺病毒构建 腺病毒载体 蛋白水平 基因功能 实验技术 体细胞 显著性 验证 筛选 基因 成功 研究 | ||
【权利要求书】：
1.一种牛丝氨酸苏氨酸激酶STK11干扰腺病毒构建方法，其特征在于，该方法首先筛选干扰效率最高的shRNA序列，然后将该shRNA序列与干扰腺病毒载体重组，构建STK11干扰腺病毒；
所述的shRNA序列为：
5’-GACGACGAGCTCTTCGACATTTCAAGAGAATGTCGAAGAGCTCGTCGTCTTTTTTAGATCTG-3’。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述筛选干扰效率最高的shRNA序列按以下步骤进行：
步骤A1，克隆秦川牛丝氨酸苏氨酸激酶11(STK11)基因编码区；
步骤A2，构建psicheckⅡ-STK11表达载体；
步骤A3，设计并合成靶向STK11基因的shRNA片段；
步骤A4，构建pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA表达载体；
步骤A5，shRNA干扰效率的测定与筛选。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的构建STK11干扰腺病毒按以下步骤进行：
步骤B1，构建载体pDC316-EGFP-ShRNA；
步骤B2，pDC316-EGFP-ShRNA-cSTK11腺病毒包装；
步骤B3，pDC316-EGFP-ShRNA-cSTK11腺病毒扩增、滴度测定；
步骤B4，pDC316-EGFP-ShRNA-cSTK11腺病毒侵染效率与干扰效率的检测。
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