[发明专利]一种广地龙或其炮制品的特征指纹图谱及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种广地龙或其炮制品的特征指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）供试品溶液制备：将广地龙生品或其炮制品粉碎，加入NaCl溶液，超声提取，离心，取上清液，用NaCl溶液定容，过滤，得到供试品溶液；

（2）对照品溶液制备：取次黄嘌呤、肌苷、尿嘧啶对照品，加NaCl溶液溶解，得到对照品溶液；

（3）高效液相色谱检测，构建广地龙生品或其炮制品的特征指纹图谱；

所述步骤（3）中色谱条件为：

色谱柱：C18柱；

流动相：以0.01mol磷酸二氢钾溶液为流动相A，以70%甲醇溶液为流动相B进行梯度洗脱，所述流动相梯度洗脱条件为：0~5min，流动相中A100%，流动相中B0%；5~20min，流动相中A100%→85%~80%，流动相中B0%→15%~20%；20~30min，流动相中A85%~80%→65%~50%，流动相中B15%~20%→35%~50%；30~40min，流动相中A65%~50%→0%，流动相中B35%~50%→100%；40~45min，流动相中A0%，流动相中B100%；

检测器：紫外检测器；

流速：0.8~1.0mL/min；

检测波长：250~260nm；

柱温：20~25℃；

分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10~15μL，注入高效液相色谱仪，测定。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤（1）中，NaCl溶液的浓度为0.9%，超声提取的时间为20~30min，离心转速为5000r·min^-1，离心时间为10~20min，供试品溶液中广地龙生品或其炮制品与NaCl溶液的质量体积比为1:20。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤（2）中，NaCl溶液的浓度为0.9%，对照品溶液中次黄嘌呤的浓度为80~100μg/mL，肌苷的浓度为80~100μg/mL，尿嘧啶的浓度为80~120μg/mL。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤（3）中构建广地龙或其炮制品的特征指纹图谱的方法为：通过对照品溶液和供试品溶液色谱图中的色谱峰出峰时间和色谱峰是否存在进行比较，得出供试品溶液图谱中的共有特征峰；对11批广地龙炮制品样品进行检测，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件生成由21个共有特征峰构成的广地龙炮制品特征指纹图谱；对11批广地龙生品样品进行检测，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件生成由20个共有特征峰构成的广地龙生品特征指纹图谱。

5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述广地龙炮制品特征指纹图谱包括21个共有特征峰，其中，1号峰为尿嘧啶，7号峰为次黄嘌呤，11号峰为肌苷，其他为未知成分峰；

以肌苷11号峰为参照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰：0.356~0.362；2号峰：0.374~0.377；3号峰：0.394~0.401；4号峰：0.498~0.501；5号峰：0.520~0.527；6号峰：0.544~0.546；7号峰：0.626~0.629；8号峰：0.701~0.710；9号峰：0.708~0.730；10号峰：0.867~0.868；11号峰：1.000；12号峰：1.017~1.021；13号峰：1.033~1.050；14号峰：1.048~1.075；15号峰：1.071~1.087；16号峰：1.085~1.099；17号峰：1.126~1.129；18号峰：1.162~1.167；19号峰：1.233~1.238；20号峰：1.596~1.606；21号峰：1.711~1.723。