[发明专利]用于检测食源性致病菌的核酸试剂、试剂盒及系统

权利要求书

1.一种用于检测食源性致病菌的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1-42所示的引物和SEQ ID NO.45-65所示的探针。

2.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，相对于1μM的SEQ ID NO.1所示的引物，分别由SEQ ID NO.2-42所示的引物的含量各自为0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.5-0.6μM、0.8-0.1μM、0.5-0.6μM、0.6-1.0μM、0.5-0.6μM、0.8-1.0μM、0.4-0.5μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.4-0.5μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.4-0.5μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.6-0.8μM、0.3-0.5μM、0.6-1.0μM、0.4-0.5μM、0.6-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM、0.3-0.5μM、0.8-1.0μM和0.4-0.5μM，分别由SEQID NO.45-65所示的探针的含量各自独立地为0.1-0.3μM。

3.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂还包括阳性内质控；所述的阳性内质控含有SEQ ID NO.43-44所示的引物、SEQ ID NO.66所示的探针和pET28a质粒。

4.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括A管、B管、C管和D管；A管含有SEQ ID NO.1-12,43-44所示的引物和SEQ ID NO.45-50,66所示的探针；B管含有SEQ IDNO.13-24,43-44所示的引物和SEQ ID NO.51-56,66所示的探针；C管含有SEQ ID NO.25-36,43-44所示的引物和SEQ ID NO.57-62,66所示的探针；D管含有SEQ ID NO.37-42,43-44所示的引物和SEQ ID NO.63-65,66所示的探针。

5.根据权利要求4所述的核酸试剂，其中，SEQ ID NO.45-47,51-53,57-59,63所示的探针具有第一荧光标记；SEQ ID NO.48-49,54-55,60-61,64-65所示的探针具有第二荧光标记；SEQ ID NO.50,56,62,66所示的探针具有第三荧光标记；所述第一荧光标记、所述第二荧光标记、所述第三荧光标记各不相同，且各自独立地选自FAM荧光标记、JOE荧光标记、HEX荧光标记、VIC荧光标记、TAMRA荧光标和ROX荧光标记中的一种。

6.一种用于检测食源性致病菌的试剂盒，该试剂盒含有权利要求1～5中任意一项所述的核酸试剂，并且可选地，所述试剂盒还含有反应体系缓冲液、氯化镁、DNA聚合酶、dNTP和水中的至少一种。

7.权利要求1～5中任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测食源性致病菌的试剂盒中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其中，所述食源性致病菌包括沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌、结肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、阪崎肠杆菌、大肠埃希氏菌、霍乱弧菌、产志贺毒素大肠杆菌、气单胞菌属、弯曲菌属、弧菌属、产气荚膜梭菌、变形杆菌、蜡样芽孢杆菌、嗜水气单胞菌和副溶血性弧菌的大流行菌株。

9.一种用于检测食源性致病菌的系统，该系统包括采样器，具有A管检测器、B管检测器、C管检测器、和D管检测器的PCR仪，计算装置以及输出装置，所述采样器为容纳食源性致病菌症状的样本或核酸的容器，所述检测器为装载有权利要求5所述的核酸试剂的核酸试剂储藏容器，所述PCR仪包括第一荧光通道、第二荧光通道、第三荧光通道和第四荧光通道；所述第一荧光通道标记、所述第二荧光通道、所述第三荧光通道和所述第四荧光通道各不相同，且各自独立地选自FAM荧光通道、JOE荧光通道、HEX荧光通道、VIC荧光通道、TAMRA荧光通道和ROX荧光通道中的一种，所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下的判别：

空白对照和阴阳性对照成立，则检测结果有效；若A管第一荧光通道有Tm值为58.6℃对应的溶解峰曲线判定为沙门氏菌阳性；A管第一荧光通道有Tm值为62.1℃对应的溶解峰曲线判定为志贺氏菌阳性；A管第一荧光通道有Tm值为65.4℃对应的溶解峰曲线判定为副溶血性弧菌阳性；A管第二荧光通道有Tm值为59.2℃对应的溶解峰曲线判定为空肠弯曲菌阳性；A管第二荧光通道有Tm值为64.5℃对应的溶解峰曲线判定为结肠弯曲菌阳性；A管第三荧光通道有Tm值为57.8℃对应的溶解峰曲线判定为金黄色葡萄球菌阳性；A管第三荧光通道有Tm值为60℃对应的溶解峰曲线判定为IAC阳性，用于质控样本提取、检测质量；B管第一荧光通道有Tm值为58℃对应的溶解峰曲线判定为单核细胞增生性李斯特氏菌阳性；B管第一荧光通道有Tm值为61.2℃对应的溶解峰曲线判定为小肠结肠炎耶尔森氏菌阳性；B管第一荧光通道有Tm值为64.9℃对应的溶解峰曲线判定为阪崎肠杆菌阳性；B管第二荧光通道有Tm值为57.7℃对应的溶解峰曲线判定为大肠埃希氏菌阳性；B管第二荧光通道有Tm值为63.5℃对应的溶解峰曲线判定为霍乱弧菌阳性；B管第三荧光通道有Tm值为57.4℃对应的溶解峰曲线判定为产志贺毒素的大肠杆菌阳性；B管第三荧光通道有Tm值为60℃对应的溶解峰曲线判定为IAC阳性，用于质控样本提取、检测质量；C管第一荧光通道有Tm值为57.3℃对应的溶解峰曲线判定为气单胞菌属阳性；C管第一荧光通道有Tm值为61.6℃对应的溶解峰曲线判定为弯曲菌属阳性；C管第一荧光通道有Tm值为64.9℃对应的溶解峰曲线判定为弧菌属阳性；C管第二荧光通道有Tm值为57.4℃对应的溶解峰曲线判定为产气荚膜梭菌阳性；C管第二荧光通道有Tm值为62.6℃对应的溶解峰曲线判定为变形杆菌阳性；C管第三荧光通道有Tm值为63.9℃对应的溶解峰曲线判定为蜡样芽孢杆菌阳性；C管第三荧光通道有Tm值为60℃对应的溶解峰曲线判定为IAC阳性，用于质控样本提取、检测质量；D管第一荧光通道有Tm值为62.6℃对应的溶解峰曲线判定为嗜水气单胞菌阳性；D管第二荧光通道有Tm值为63.1℃对应的溶解峰曲线判定为副溶血性弧菌大流行菌株；A管第三荧光通道、B管第三荧光通道、C管第三荧光通道和D管第三荧光通道分别有Tm值为60℃对应的溶解峰曲线判定为阳性内质控阳性。