[发明专利]用于检测食源性致病菌的核酸试剂、试剂盒及系统

说明书

本公开涉及一种用于检测食源性致病菌的核酸试剂、试剂盒及系统，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑42所示的引物和SEQ ID NO.45‑65所示的探针。本公开通过以上所述的引物和探针建立了检测19种易致病的食源性致病菌的核酸试剂、试剂盒及系统，能够实现快速、全面、敏感、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对多种食源性致病菌同时进行检测的敏感性、特异性和简便性。

技术领域

本公开涉及食源性致病菌的检测，具体地，涉及一种用于检测食源性致病菌的核酸试剂、试剂盒及系统。

背景技术

食源性疾病是世界性的公共健康问题，其大规模爆发在许多国家都经常发生。全球化的食品供应意味着食源性疾病可以在不同的国家快速传播蔓延,严重危害人类健康。目前世界上大概有250种食源性疾病。高发病率以及特定人群如婴幼儿、老人、免疫力低下者中的高致死率是其主要特点。食源性疾病基本上都是由摄入被细菌、病毒、寄生虫或有毒的化学物质、生物毒素污染的水和食物等引起的。引起食源性疾病的致病菌叫做食源性致病菌，主要包括细菌、真菌和病毒。

食源性致病菌是引起食物中毒的重要生物学因素。随着国家对食品安全工作的重视，快速筛查食物中毒原因成为当务之急。根据美国农业部经济研究局的统计结果显示，沙门氏菌、致病性大肠杆菌(EPEC、ETEC、EIEC、EAEC、EHEC)、弯曲杆菌、副溶血性弧菌、葡萄球菌及毒素、致病性蜡样芽胞杆菌、变形杆菌属、李斯特氏菌、志贺氏菌等几类重要的细菌会造成巨大的经济损失。其中副溶血性弧菌是导致我国食物中毒的重要食源性致病菌之一，并且副溶血性弧菌菌株存在多种血清型，例如O3：K6及O4：K68等，导致在食物链中存在大流行菌株且成为食源性疾病的主要致病原因。

近年来食品安全得到了世界各国的普遍关注。每年向卫生部上报的食物中毒人数逐年递增，且大部分是由食源性致病菌所引起。据世界卫生组织估计，全世界每年的食源性疾病患者中，70％都是由致病性微生物引起的。由此可见，食源性疾病与食品污染问题已成为世界范围内举足轻重的公共卫生问题。所以建立有效的食源性致病菌检测体系，快速并且准确地完成对食品中致病菌的检测已成为保障食品安全和防止疾病传染的关键。

在食源性致病菌的检测方法中，传统的平板培养法是广泛使用的方法。其优点是操作简单、成本低。缺点是检测灵敏度低，工作量大，检测周期长，每次只能检出1种致病菌。对于“活的非可培养”状态细菌，传统的培养法会引起假阴性结果的产生，造成漏检，增加食源性疾病的传播几率。目前，已有34个属的68种细菌被证实可进入这一状态并保持毒力或致病性。

核酸法是食源性致病菌检测中普遍采用的一类方法(主要包括普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)，多重PCR(multiplex PCR,mPCR)，实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR，qPCR)，核酸依赖性扩增(nuclear acid sequence-basedamplification，NASBA)，环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)和基因芯片等，通过设计引物和探针，检测目标致病菌的特异DNA或RNA序列。其特点是快速、准确、灵敏，能够实现样品的痕量检测，在食品检验及食品突发事故应急处理中发挥重要作用。但是在技术上也存在着一定的不足，如易污染；易出现假阳性或假阴性；食品基质影响致病菌DNA的分离和提取，造成漏检等。

常用的PCR检测需要前期复杂的样本处理过程、繁琐的试验程序及复杂的结果判断。此外，RT-PCR所能覆盖的检测目标有限，需要通过多体系的设置才能实现多目标的检测，增加了操作的复杂性。

发明内容

本公开的目的是提供一种快速、准确、一体化的检测多种食源性致病菌的核酸试剂、试剂盒及系统。