[发明专利]一种提高磷脂酶C稳定性的方法

说明书

本发明提供了一种磷脂酶C组合物。本发明提供的组合物中包含磷脂酶C酶液和Fe²⁺。本发明的磷脂酶C组合物能够在没有多羟基物质保护剂的情况下，保持长时间的稳定，有利于下游的进一步开发应用。

技术领域

本发明涉及酶制剂，具体涉及一种提高磷脂酶C稳定性的方法。

背景技术

磷脂酶C(phospholipase C，简称PLC)是一类可催化水解磷脂C3的磷脂酰键的水解酶，在药品生产、油脂精炼、食品加工、磷脂改性等领域有着广泛应用。在磷脂酶C的纯化过程中，由于磷脂酶C是生物活性物质，需要尽量缩短生产时间，并且全程保持低温，以保证磷脂酶C的稳定性，并且在成品制备中，必须加入常规多羟基物质如甘油、山梨醇等作为保护剂，延长货架期，否则容易变浑，然后沉淀失活，但是一旦加入保护剂后，应用范围变窄，比如磷脂酶C的进一步固定化应用会存在很大影响，一方面因为甘油等多羟基成分极性较强，残留在固定化磷脂酶C中会吸附极性成分，加速酶的失活，另一面保护剂会干扰载体对磷脂酶C的吸附效率。因此，本行业急需一种不使用保护剂而能让磷脂酶C稳定的方法，以利于磷脂酶C的生产以及进一步的下游应用开发。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种磷脂酶C组合物。

本发明提供的组合物中包含磷脂酶C酶液和Fe²⁺。

在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述Fe²⁺浓度为25-120mg/L。在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述Fe²⁺浓度为为60-120mg/L。

在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述Fe²⁺源自亚铁离子盐。在本发明的一个或多个优选实施方案中，亚铁离子盐为亚铁离子无机盐或亚铁离子有机盐。在本发明的一个或多个优选实施方案中，亚铁离子盐为FeCl₂、FeSO₄、醋酸亚铁、和/或富马酸亚铁。

在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述磷脂酶C酶液中还包含Cu²⁺，和/或Zn²⁺。在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述磷脂酶C酶液中包含Cu²⁺，Fe²⁺,Zn²⁺。

在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述Cu²⁺浓度为25-120mg/L。在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述Cu²⁺浓度为60-120mg/L

在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述Zn²⁺浓度为25-120mg/L。在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述Zn²⁺浓度为60-120mg/L。

在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述磷脂酶C酶液中不含有多羟基物质保护剂，所述多羟基物质保护剂为甘油和山梨醇。

在本发明的一个或多个优选实施方案中，所述磷脂酶C酶液中还包含防腐剂和/或缓冲液。

在本发明的一个或多个具体实施方案中，所述防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钙中的一种或多种。在本发明的一个或多个具体实施方案中，所述缓冲液为醋酸钠缓冲液。

在本发明的一个或多个具体实施方案中，所述磷脂酶C为来源于蜡样芽胞杆菌的磷脂酶C。

本发明还提供了上述组合物用于脱胶的用途或制备固定化磷脂酶C的用途。在本发明的一个或多个具体实施方案中，所述脱胶为油脂脱胶。

本发明还提供了一种提高磷脂酶C稳定性的方法。

本发明提供的方法包括在磷脂酶C酶液中加入Fe²⁺。