[发明专利]一种免洗标记特定蛋白质的荧光探针及其合成方法和应用

权利要求书

1.一种免洗标记特定蛋白质的荧光探针，其特征在于该探针分子结构式如下：

其中R为：(CH₂)_nCH₃,(n＝0-4),苄基或吡啶亚甲基。

2.根据权利要求1所述免洗标记特定蛋白质的荧光探针的合成方法，其特征在于具体步骤如下：

(1)中间体N-(4-羟甲基)苄基-4-脂肪胺基-1,8-萘酰亚胺的合成

将N-(4-羟甲基)苄基-4-溴-1,8-萘酰亚胺，溶于乙二醇甲醚中，并向其中加入脂肪伯胺，将反应液缓慢升温至100-140℃，并在氮气保护下反应10-24h。减压除去溶剂，硅胶柱分离，以体积比为30～200:1的二氯甲烷和甲醇为洗脱剂，除去溶剂，得棕黄色固体N-(4-羟甲基)苄基-4-脂肪胺基-1,8-萘酰亚胺；

(2)SNAP蛋白的荧光探针的合成

将N-(4-羟甲基)苄基-4-脂肪氨基-1,8-萘酰亚胺，叔丁醇钾，2-氨基-6-(N-甲基)四氢吡咯基鸟嘌呤、叔丁醇钾置于史莱克瓶中，氮气置换2-5次后加入2-10mL干燥的N,N-二甲基甲酰胺；室温反应2-10h后，加压出去溶剂，硅胶柱分离，以体积比为10～100:1的二氯甲烷和甲醇为洗脱剂，除去溶剂得靶向SNAP蛋白的荧光探针。

3.根据权利要求2所述的一种免洗标记特定蛋白质的荧光探针的合成方法，其特征在于步骤(1)中，N-(4-羟甲基)苄基-4-溴-1,8-萘酰亚胺与脂肪伯胺的质量比为1:0.5-2；N-(4-羟甲基)苄基-4-溴-1,8-萘酰亚胺的质量与乙二醇甲醚的体积比为50-100:1mg/mL；

所述脂肪伯胺包括N,N-二甲基乙二胺、N,N-二乙基乙二胺、N,N-二丙基乙二胺、N,N-二丁基乙二胺、N,N-二苄基乙二胺或N,N-二吡啶亚甲基乙二胺。

4.根据权利要求2所述的一种免洗标记特定蛋白质的荧光探针的合成方法，其特征在于步骤(2)中，N-(4-羟甲基)苄基-4-脂肪氨基-1,8-萘酰亚胺、2-氨基-6-(N-甲基)四氢吡咯基鸟嘌呤、叔丁醇钾质量比为1:1-3:0.5-2；N-(4-羟甲基)苄基-4-脂肪氨基-1,8-萘酰亚胺的质量与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为20-60:1mg/mL。

5.根据权利要求1所述的免洗标记特定蛋白质的荧光探针的应用，其特征在于，该免洗标记特定蛋白质的荧光探针用于体外目标蛋白的免洗标记，或者细胞内特定蛋白的免洗标记。

6.根据权利要求5所述的免洗标记特定蛋白质的荧光探针的应用，其特征在于：所述的免洗标记过程如下：(1)通过基因工程方法将SNAP标签蛋白与目标蛋白融合表达；(2)该荧光探针通过与SNAP标签蛋白专一性共价连接实现对目标蛋白的标记。

7.根据权利要求5所述的的免洗标记特定蛋白质的荧光探针的应用，其特征在于：免洗标记特定蛋白质的荧光探针的的标记过程中，荧光探针标记目标蛋白后不需要清洗，直接进行光谱检测或者荧光成像。