[发明专利]一类高稳定性的免洗Halo-tag探针及其合成方法和生物应用

权利要求书

1.一类高稳定性的免洗Halo-tag探针，其特征在于其结构如下：

其中，R₁与R₂分别为H、若R₁为H，则R₂不为H。

2.如权利要求1所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针，特征在于：探针分子在水中量子产率最高为0.80。

3.如权利要求1所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针的合成方法，其特征包含步骤如下：

(1)中间体的合成：

将4-溴-5-硝基-1,8-萘酐，二甘醇胺溶于无水乙醇中；将反应液加热至40-90℃，搅拌1-10h；将反应液冷却至室温后，减压除去溶剂后，硅胶柱分离，以体积比为100～800:1的二氯甲烷和甲醇为洗脱剂，减压除去溶剂得米白色固体

(2)中间体的合成

将4-溴-1,8-萘酐，二甘醇胺溶于无水乙醇中；将反应液加热至40-90℃，搅拌1-6h；将反应液冷却至室温后，过滤后干燥得灰白色

(3)中间体的合成

将(1)或(2)中所得中间体，溶于乙二醇甲醚中，并向其中加入脂肪环胺；将反应液缓慢升温至100-140℃，并在氮气保护下反应10-24h；减压除去溶剂，硅胶柱分离，以二氯甲烷和甲醇为洗脱剂，除去溶剂，得棕黄色固体所述的脂肪环胺为：氮丙啶、氮杂环丁烷、四氢吡咯；

(4)Halo-tag探针的合成

与NaH置于史莱克瓶中，并氮气置换2-5次；将1-碘-6-氯己烷溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺后，加入反应液中；室温下搅拌1-5h后，减压除去溶剂，硅胶柱分离，以体积比为100～400:1的二氯甲烷和甲醇为洗脱剂，除去溶剂得到免洗Halo-tag探针。

4.根据权利要求3所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针的合成方法，其特征在于步骤(1)中，4-溴-5-硝基-1,8-萘酐与二甘醇胺的质量比为1:0.5-1；4-溴-5-硝基-1,8-萘酐的质量与乙醇的体积比为1:20-80g/mL。

5.根据权利要求3所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针的合成方法，其特征在于步骤(2)中，4-溴-1,8-萘酐与二甘醇胺的质量比为1:0.5-1；4-溴-1,8-萘酐的质量与乙醇的体积比为1:20-80g/mL。

6.根据权利要求3所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针的合成方法，其特征在于步骤(3)中，(1)或(2)中所得中间体与脂肪环胺的质量比为1:1-3；(1)或(2)中所得中间体与乙二醇甲醚的体积比为10-20:1mg/mL。

7.根据权利要求3所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针的合成方法，其特征在于步骤(4)中，与NaH的质量比为5-10:1；

的质量与1-碘-6-氯己烷体积比为0.5-1mg/μL；

的质量与N,N-二甲基甲酰胺体积比为5-20:1mg/mL。

8.如权利要求1所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针在活细胞及组织内对Halo-tag及其融合蛋白成像领域的应用。

9.如权利要求1所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针在Halo-tag蛋白的识别与检测领域的应用。

10.如权利要求1所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针在单分子检测中的应用。

11.如权利要求1所述的一类高稳定性的免洗Halo-tag探针在STED及SIM超分辨成像中的应用。