[发明专利]一种测定血浆中普芦卡必利浓度的方法

说明书

本发明公开了一种测定血浆中普芦卡必利浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的有机溶媒进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测，本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，适合于测定血浆中普芦卡必利的浓度。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及体内药物的分析测定方法，具体涉及一种测定血浆中普芦卡必利浓度的方法。

背景技术

琥珀酸普芦卡必利(Prucalopride succinate)为苯并呋喃类促肠动力药，是特异性5-HT4受体完全激动剂，具有较高选择性和特异性5-HT4受体作用，增加胆碱能神经递质的释放，刺激肠蠕动反射，增强结肠收缩和近端结肠传输，能够有效地缓解便秘病人的症状，主要用于治疗各种便秘及手术的胃肠道蠕动无力和假性梗阻。

口服琥珀酸普芦卡必利后，其在体内脱去琥珀酸，转变成普芦卡必利被吸收入血。本发明建立了一个具有高灵敏度和高选择性的液相色谱-串联质谱方法(LC-MS/MS)，用于测定血浆中普芦卡必利的浓度，并通过该方法对普芦卡必利在人体内的药物代谢情况进行探索性研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种准确高效测定血浆中普芦卡必利浓度的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种测定血浆中普芦卡必利浓度的方法，血浆样品经预处理后经液质联用系统检测其浓度，具体方法包括如下步骤：

(1)血浆样品预处理：取血浆样品，加入同位素内标普芦卡必利-¹³CD₃和氢氧化钠溶液，加入乙酸乙酯萃取，吸取上层有机相，40℃下离心浓缩挥干，加入80％(v/v)甲醇水溶液溶解，离心后取上清液；

(2)将步骤(1)预处理后的血浆样品进行液相色谱分离：色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18，3.0×100mm，3.5μm；流动相：体积比为80：20的甲醇与1mmol·L^-1醋酸铵水溶液等度洗脱；流速：400μL·min^-1；柱温：35℃；进样量：4μL；分析时间：5min；

(3)质谱测定：离子源为电喷雾离子化电离源ESI；离子检测方式为多反应监测；离子极性为正离子；离子源电压IS：5500V；离子源温度TEM：500℃；碰撞气CAD：10psi；气帘气CUR：25psi；离子源Gas1：60psi；离子源Gas2：65psi；碰撞室入口电压：10V；碰撞室出口电压：14V；检测对象的离子选择通道：普芦卡必利，[M+H]⁺，m/z 368.4/196.0，DP 96V，CE40eV；同位素内标普芦卡必利-¹³CD₃，[M+H]⁺，m/z 374.4/198.0，DP91V，CE 43eV；

(4)计算：采用内标法，以普芦卡必利和同位素内标普芦卡必利-¹³CD₃的峰面积比值代入标准曲线方程计算普芦卡必利浓度。

步骤(1)中，于10mL玻璃试管中精密加入血浆样品0.4mL，精密加入10ng·mL^-1同位素内标普芦卡必利-¹³CD₃溶液100μL，1mol.L^-1的氢氧化钠80μL，加入乙酸乙酯4mL，旋涡振荡10min，2000r·min^-1离心10min，吸取上层有机相3mL，40℃离心浓缩挥干，加入80％(v/v)甲醇水溶液200μL复溶，旋涡1min，12000g离心5min，吸取上清液150μL进行分析。

其中，所述的血浆为口服琥珀酸普芦卡必利后的血浆。本发明方法重点是保护口服琥珀酸普芦卡必利后，血浆中普芦卡必利的检测方法，从而为研究普芦卡必利的体内代谢奠定基础。