[发明专利]无创超声处理细胞在制备外泌体中的应用、外泌体及其制备方法和应用有效
申请号: | 201811551714.6 | 申请日: | 2018-12-18 |
公开(公告)号: | CN109554341B | 公开(公告)日: | 2021-11-19 |
发明(设计)人: | 郑海荣;严飞;邓志婷;肖杨 | 申请(专利权)人: | 深圳先进技术研究院 |
主分类号: | C12N5/079 | 分类号: | C12N5/079;C12N13/00;A61K35/30;A61P25/28;A61P25/16;A61P9/10;A61P25/00 |
代理公司: | 深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙) 44316 | 代理人: | 吴乃壮 |
地址: | 518000 广东省深圳*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 超声 处理 细胞 制备 外泌体 中的 应用 及其 方法 | ||
1.一种外泌体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:采用无创超声处理细胞,提取得到外泌体;
包括以下步骤:将无创超声处理过的神经细胞培养36-60小时后提取外泌体,得到外泌体;
所述神经细胞包括SH-SY5Y细胞;
超声装置对细胞培养皿进行刺激,总的超声刺激时间持续5分钟,具体超声参数,探头频率:1MHz,幅值:100mV,超声时间:5分钟。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述无创超声处理包括:在探头频率0.5-1.5MHz和幅值10-200mV条件下无创超声细胞1-30min。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述提取外泌体的方法包括:将去除神经细胞和凋亡小体的培养基进行浓缩得到浓缩液,获得浓缩液与沉淀剂作用的沉淀物,分离沉淀物得到外泌体。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述沉淀剂包括聚乙二醇4000或聚乙二醇6000,
所述浓缩液和所述沉淀剂的体积比为1:0.5-1.5;
所述浓缩液和所述沉淀剂的作用条件为:2-8℃沉淀20-28小时;
所述分离沉淀物的步骤为:90000-110000×g离心1.5-2.5小时,沉淀为外泌体。
5.权利要求1-4任一项所述的制备方法制备得到的外泌体。
6.根据权利要求5所述的外泌体,其特征在于,所述外泌体中miR-27a-3p、miR-27b-3p和miR-7-5p表达丰度提高。
7.权利要求1-4任一项所述的制备方法或权利要求5或6所述的外泌体在如下A)-D)中任意一种的应用:
A)制备预防和/或治疗阿尔茨海默病药物;
B)制备预防和/或治疗帕金森病药物;
C)制备预防和/或治疗脊柱损伤药物;
D)制备预防和/或中风后脑损伤药物。
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