[发明专利]一种诱导甘薯植株再生的方法

说明书

本发明公开了一种诱导甘薯植株再生的方法。所述方法包括选取田间生长的健康、茁壮的甘薯植株，进行剥取茎尖、诱导胚性愈伤、诱导体细胞胚和体细胞胚成苗四个阶段，实现甘薯植株再生。在体细胞胚的诱导过程中，采用含有NAA 0～0.1mg/L、6‑BA 0.2～0.5mg/L、ABA 0.1～0.5mg/L和活性炭0～0.2％且NAA与活性炭不同时为0的MS培养基进行诱导，使徐紫薯8号从剥取茎尖诱导胚性愈伤到形成再生苗仅用了160d。本发明方法不仅缩短了甘薯植株再生的时间，而且为快速获得和繁殖脱毒苗奠定了技术基础，保证了甘薯种苗良好的品质。

技术领域

本发明涉及一种诱导甘薯植株再生的方法，属于生物技术领域。

背景技术

甘薯作为重要的粮食、饲料、工业原料以及新型能源作物，广为种植。甘薯种类繁多，例如徐紫薯8号，紫皮深紫肉，高产稳产，夏薯产量在2300公斤/亩左右，春薯在 3500公斤/亩左右；抗旱性和耐盐性好；花青素含量高，可以预防癌症，改善心血管疾病类，预防肠道疾病，抗衰老等；蒸薯食味好；开发用途广，茎叶可食用、茶用和作为绿化用苗，薯块宜鲜食或加工紫薯全粉、薯泥、紫薯粉丝、紫薯酒和紫薯醋等。目前由于甘薯病毒病的影响，能否快速获得大量健康种苗成为限制其推广应用的主要因素。

甘薯胚性愈伤组织可以由体细胞胚胎发生途径再生植株，是甘薯转基因利用的主要受体材料。中国专利201110146697.X公开了一种甘薯胚性愈伤长期继代增殖的组培方法，利用茎尖分生组织培养过程中诱导形成的胚性愈伤进行形态筛选继代，达到长期保存和扩增胚性愈伤的目的，具体为在茎尖分生组织脱分化诱导出愈伤后，筛选可保持胚性的结构致密、近球形的胚性愈伤，剔除鱼雷胚、子叶胚和结构松散的非胚性愈伤，移入含有1～3mg/L 2，4-D的MS固体培养基中培养每45d后，待胚性愈伤长至5～8mm，选择颗粒致密的心形和球形胚性愈伤部分，再重复上述方法培养，最后将增殖的胚性愈伤组织转移到含1.0mg/L ABA的MS固体培养基中光照下培养3～4周，体细胞胚发育并成长为小植株。该方法试验周期长，对操作技术要求较高，不适于大规模推广。中国专利201710430208.0公开了一种用甘薯叶柄进行愈伤组织诱导和分化的方法，将叶柄剪成长度为1～2cm的切段，接种到MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L无菌培养基上，然后将培养20天得到的愈伤转接到MS+2,4-D 0.01mg/L+KT 1.0mg/L的分化培养基上培养得到甘薯组培苗。但是上述方法存在以下问题：(1)用叶柄诱导胚性愈伤诱导率较低，适用性窄；(2)如果用非脱毒植株的叶柄作为外植体会导致获得的愈伤组织和分化出的组培苗带有病毒；(3)将培养的愈伤直接转入分化培养基成苗周期长，繁殖效率低，不适合短时间获得大量甘薯苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种培养周期短、快速获得健康的甘薯苗的诱导甘薯植株再生的方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种诱导甘薯植株再生的方法，具体步骤如下：

(1)外植体的准备：选取田间生长健康、茁壮的甘薯植株，在植株顶端剪取1.5～2cm的健康茎尖作为外植体；

(2)外植体的灭菌：将剪取的茎尖洗涤干净，无菌条件下，依次用70％酒精和0.1％的升汞消毒，再用无菌水洗干净；

(3)愈伤组织的诱导：剥取茎尖生长点，置于胚性愈伤诱导培养基中，诱导形成胚性愈伤组织；

(4)体细胞胚的诱导：将诱导好的胚性愈伤组织转移至含有NAA 0～0.1mg/L、6-BA0.2～0.5mg/L、ABA 0.1～0.5mg/L和活性炭0～0.2％且NAA与活性炭不同时为0的MS 培养基中，诱导至形成体细胞胚；

(5)植株成苗：将体细胞胚转移至MS培养基中，培养至成苗。

在本发明的实施例中，所述的甘薯为徐紫薯8号。