[发明专利]一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法

权利要求书

1.一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法，其特征在于，所述方法包括步骤如下：

（1）使用Poly-C以及羧基荧光素对可卡因核酸适配体进行修饰和荧光标记，加入到磷酸缓冲盐溶液中配置成Poly-C可卡因核酸适配体的PBS缓冲液；

（2）加入氧化石墨烯对Poly-C修饰及荧光标记后的可卡因核酸适配体的DNA进行淬灭，得到Poly-C-GO可卡因核酸适配体；

（3）在步骤（2）中得到的Poly-C-GO可卡因核酸适配体中加入吐温20进行修饰，并测量其在520nm处的荧光强度F₀；

（4）吐温20修饰后的Poly-C-GO可卡因核酸适配体中加入不同浓度可卡因标准溶液，进行荧光恢复，并测量在520nm处加入可卡因后的荧光强度F；

（5）计算加入可卡因前后的荧光增长率F/F₀–1，以可卡因标准溶液浓度为横坐标，以荧光增长率为纵坐标，得到可卡因浓度的标准曲线；

（6）将待测可卡因样本按照步骤（1）-步骤（4）的方法获得加入待测可卡因后的荧光强度值F'，代入到步骤（5）得到的标准曲线中，获得待测可卡因样本的浓度；步骤（1）中，所述的修饰是对可卡因核酸适配体片段进行Poly-C修饰，Poly-C修饰后的可卡因核酸适配体片段核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；步骤（2）中，所述氧化石墨烯的浓度为5-7µg/mL，步骤（3）中，吐温20的浓度为0.05%-0.5%；步骤（5）中，所述标准曲线在0.01-50 nM范围内，线性回归方程为：F/F₀=4.54157 C + 0.82081，线性相关系数为0.99263，C为可卡因浓度，单位为nM。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述的荧光恢复温度为室温，时间为20-40min。