[发明专利]一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法

说明书

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法。本发明使用多胞嘧啶修饰可卡因核酸适配体并荧光标记，氧化石墨烯对修饰后的可卡因核酸适配体进行物理性吸附，吐温20去除GO表面对可卡因的吸附，以此来检测可卡因；加入吐温20后荧光恢复明显优于没有加入吐温20时，利用GO吸附具有Poly‑C的可卡因适配体，无需额外化学修饰DNA，还能有效固定DNA进行淬灭，poly‑C修饰的可卡因适配体能有效降低合成成本，方法简单、快速准确且灵敏性高。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法。

背景技术

可卡因是一种能严重危害人类身心健康的兴奋剂，会造成一系列精神性疾病，甚至死亡。寻找高灵敏的检测方法对治疗以及预后等具有十分重要的意义，目前，传统的可卡因检测主要通过色谱、光谱及电化学等技术。但是，这些方法存在程序复杂，耗时长，成本高等不足之处。随着科技的发展，DNA功能化纳米材料吸引了广泛的研究兴趣，传感器领域对可卡因的检测包括电化学传感器、酶联免疫传感器、压电传感器、场效应晶体管传感器等。这些传感器同样存在一些问题，如背景信号强，检测极限低，操作复杂，成本高。

发明内容

针对以上问题，本发明的目的是针对现有的可卡因检测方法的缺陷，提供一种操作简便、灵敏度高、选择性强、成本低的检测可卡因的方法。为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

提供一种检测可卡因的方法，使用多胞嘧啶(Poly-C)修饰可卡因核酸适配体并荧光标记，氧化石墨烯（GO）对修饰后的可卡因核酸适配体进行物理性吸附，吐温20去除GO表面对可卡因的吸附，以此来检测可卡因的方法；具体包括如下步骤：

（1）使用Poly-C以及羧基荧光素（FAM）对可卡因核酸适配体进行修饰和荧光标记，加入到磷酸缓冲盐溶液中配置成Poly-C可卡因核酸适配体的PBS缓冲液；

（2）加入氧化石墨烯（GO）对Poly-C修饰及荧光标记后的可卡因核酸适配体的DNA进行淬灭，得到Poly-C-GO可卡因核酸适配体；

（3）在步骤（2）中得到的Poly-C-GO可卡因核酸适配体中加入吐温20进行修饰，并测量其在520nm处的荧光强度F₀；

（4）吐温20修饰后的Poly-C-GO可卡因核酸适配体中加入不同浓度可卡因标准溶液，进行荧光恢复，并测量在520nm处加入可卡因后的荧光强度F；

（5）计算加入可卡因前后的荧光增长率F/F₀–1，以可卡因标准溶液浓度为横坐标，以荧光增长率为纵坐标，得到可卡因浓度的标准曲线；

（6）将待测可卡因样本按照步骤（1）-步骤（4）的方法获得加入待测可卡因后的荧光强度值F’，代入到步骤（5）得到的标准曲线中，获得待测可卡因样本的浓度。

按上述方案，步骤（1）中所述的修饰是对可卡因核酸适配体片段进行Poly-C修饰，Poly-C修饰后的可卡因核酸适配体片段核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，即：5’-CCCCCCCCCCCCCCCCCATAGGGAGACAAGGATAAATCCTTCAATGAAGTGGGTCTCCC-3。所述的序列由上海生工合成并进行荧光修饰，之后加入磷酸缓冲盐溶液（PBS）。

按上述方案，步骤（2）中所述的GO的浓度为5-7µg/mL。

按上述方案，步骤（3）中所述的吐温20浓度为0.01%-1%。

按上述方案，步骤（4）中所述的荧光恢复温度为室温，时间为20-40min。

按上述方案，步骤（5）中所述，所述标准曲线在0.01-50 nM范围内，线性回归方程为：F/F₀=4.54157C+0.82081，线性相关系数为0.99263，C为可卡因浓度，单位为nM。