[发明专利]一种液相色谱串联质谱同时测定水产品中6种色素残留量的方法

说明书

本发明公开了一种液相色谱串联质谱同时测定水产品中6种色素残留量的方法，包括如下步骤：S1.称取水产样品，加入提取液进行提取，再固相萃取净化，然后浓缩、定容、过滤后即得待测试样，配制溶剂标准和基质标准曲线；S2.将S1中所得待测试样经过液相色谱串联质谱同时测定6种色素的残留量，以保留和离子碎片丰度比时间定性，定量离子峰面积外标法定量；本发明利用液相色谱串联三重四级杆质谱以保留和离子碎片丰度比时间定性，定量离子峰面积外标法定量同时测定6种水产品禁用色素残留量。经过优化后，水产品中目标物回收率达到80.0%～116%，24h内精密度和稳定性测试RSD≤15%，亚甲基蓝、孔雀石绿、亮绿、隐色孔雀石绿、结晶紫及隐色结晶紫线性范围在0.1μg/kg～20μg/kg之间线性良好，具有较大的应用前景。

技术领域

本发明涉及化学检测技术领域，更具体地，涉及一种液相色谱串联质谱同时测定水产品中6种色素残留量的方法。

背景技术

孔雀石绿(malachite green，MG)和结晶紫(crystalviolet，CV)属于三苯甲烷类染料，对鱼类的水霉病、寄生虫病等有很好的疗效，长期以来，许多国家曾将其作为水产养殖业的杀菌剂。它们在鱼体内可代谢为隐色孔雀石绿(Leucomalachite green，LMG)和隐色结晶紫(leucocrystal violet，LCV)；由于这两种化合物及其代谢物均具有潜在的致癌、致畸、致突变等副作用，近20年来许多国家陆续将其列为水产养殖行业的禁用药物。

亚甲基蓝(methylene blue，MB)又名次甲基蓝、碱性湖蓝、美蓝，是一种人工合成的噻嗪类染料，曾成功用于治疗细菌性疟疾，也是首例用于治疗疾病的人工合成化学品。亚甲基蓝对淡水鱼的水霉病、红嘴病、小瓜虫病等有很好的疗效，由于其毒性比孔雀石绿低，近年来做为孔雀石绿、硝基呋喃等禁药的替代品在水产品养殖中得到了广泛应用。另外，亚甲基蓝也被用作抗真菌剂，用来降低鱼类运输途中的死亡率。由于亚甲基蓝及其代谢物被认为对动物体有毒性并有致突变作用，在美国、日本禁止用于水产养殖。

亮绿(brilliant green，BG)与孔雀石绿同属三苯甲烷类化学物质，其毒性与孔雀石绿一致，具有潜在的致癌、致畸、致突变等副作用。

然而由于上述染料具有高效、价格低廉等优点，因而在水产养殖中违法使用的情况仍然很多，因此建立检测水产品中上述染料微量残留的方法十分必要。

现有的主要检测对象都集中在孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的检测方法以及亚甲基蓝及其代谢产物的检测方法(张玉黔,权伍英,栾燕.液相色谱-串联质谱法测定水产品中孔雀石绿及其代谢产物隐性孔雀石绿的方法研究[J].中国卫生检验杂志,2006,16(7):826-827.；周贻兵,吴坤,刘利亚,等.超高效液相色谱-串联质谱法测定鱼中孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留量[J].质谱学报,2013,34(5):294-299.；曾思瑜,蒲红,夏苏捷,等.养殖水中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫、亚甲基蓝残留量的测定[J].食品安全质量检测学报,2018(5).；张志刚,施冰,陈鹭平,等.液相色谱法同时测定水产品中孔雀石绿和结晶紫残留[J].分析化学,2006,34(5):663-667.)；惠芸华,张璇,黄冬梅,等.高效液相色谱-串联质谱法同时测定草鱼中6种阳离子染料残留量[J].分析科学学报,2015,31(4):533-536，关于亮绿的检测方法较少，而同时测定孔雀石绿、隐色孔雀石绿、甲基蓝、亮绿、结晶紫和隐色结晶紫这6种色素的方法目前还未见报道，无法满足实际的检测需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术检测方法的不足，提供一种同时同时测定水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、甲基蓝、亮绿、结晶紫和隐色结晶紫这6种禁用色素残留的、准确灵敏可靠的液相色谱串联三重四级杆质谱联用仪的检测方法，可根据保留时间和离子丰度比值进行定性，定量离子进行定量，提高方法的准确度。

本发明的第一个目的是提供一种同时提取水产品种6种色素的方法。