[发明专利]人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体及应用

说明书

本发明提供了人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体及人肺炎链球菌免疫层析检测试纸条。用重组的肺炎链球菌PspA蛋白免疫Balb/c小鼠，得到一株分泌人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株Sp‑18#，保藏编号CCTCC NO：C2017209；利用该细胞株分泌的单抗制备胶体金免疫层析试纸条，以杂交瘤细胞株Sp‑18#分泌的单克隆抗体作为标记单抗，以抗PspA蛋白多克隆抗体作为包被抗体，获得的试纸条具有检测速度快，特异性高，灵敏度高，稳定性强，制作简便等特点。结果清晰易于判断，能高效辅助肺炎链球菌感染的临床诊断。

技术领域

本发明属于免疫学领域，涉及一种人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用。

背景技术

肺炎链球菌于1881年首次由巴斯德(Louis Pasteur)及G.M.Sternberg分别在法国及美国从患者痰液中分离出。其为革兰染色阳性菌，菌体似矛头状，成双或成短链状排列的双球菌，有毒株菌体外有化学成分为多糖的荚膜。5％～10％正常人上呼吸道中携带此菌。有毒株是引起人类疾病的重要病原菌。在化脓性球菌中，肺炎链球菌的致病力仅次于金黄色葡萄球菌。肺炎链球菌主要引起大叶性肺炎以及气管炎、中耳炎、脑膜炎、胸膜炎、心内膜炎、败血症等疾病。由肺炎链球菌引起的急性肺部感染叫肺炎链球菌肺炎。若3岁以下的婴幼儿肺部受到感染，则引起支气管肺炎。儿童患肺炎是呼吸道传染病里面最为严重的问题，呼吸道传染病死亡数大于艾滋病加麻疹加疟疾等疾病之和，其死亡率非常大。有数据显示，全球发展中国家有超过1亿5千万的5岁以下儿童患肺炎，其中有超过150万儿童因为肺炎而死去。作为人口大国的中国,其肺炎死亡率也非常高，全球有40％以上肺炎死亡就发生在亚洲，肺炎死亡率在中国比例仅次于印度。另有数据统计显示，肺炎链球菌性疾病它所导致的后遗症发生率及死亡率明显高于儿童其他常见致病菌。在重症肺炎病菌中50％属于肺炎链球菌，其致死病例据统计超过50％。综上，对肺炎链球菌感染进行快速诊断，做到早发现早治疗，有着十分重要的临床意义。

目前检测呼吸道中该致病微生物的方法主要以传统方法为主，即分离鉴定法，该方法所需时间长，一般要2-3天，很难满足快速鉴定的需要；近几年发展起来的PCR技术，是一种快速、灵敏、特异性好的技术，但是目前该技术还是依赖于传统方法的前增菌步骤，而增菌液中往往还有PCR抑制剂，从而影响扩增的效果。同时，该技术还需要专业的检测设备，不适合进行床旁检测。以抗体为基础的免疫学检测已成为人体病原微生物检测不可或缺的重要技术手段。目前已发展了多种特异性免疫检测技术，如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、荧光免疫分析(FIA)、化学发光免疫分析(CIA)、免疫沉淀反应、免疫凝集反应、ELISA检测试剂盒、免疫胶体金试纸条、免疫乳胶检测试剂等。其中ELISA检测试剂盒、免疫胶体金试纸条等多种以抗体为基础的免疫学检测技术，以其简便、快速、灵敏、准确、实用的特点已成为病原微生物检测不可或缺的重要手段。因而，研究开发具有自主知识产权的病原微生物的抗体，是开发拥有自主知识产权的胶体金检测方法等的基础。

本研究选用具有种间特异性的表面蛋白PspA作为抗原，制备特异性良好的单克隆抗体，并将其应用于制备人肺炎链球菌免疫层析检测试纸条。

发明内容

为了解决背景技术中存在的上述技术问题，本发明提供了一种特异性强、敏感度高以及结果清晰易于判断的人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体及应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种产生人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述产生人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏的保藏号是保藏编号CCTCC NO：C2017209的杂交瘤细胞株Sp-18#。

一种产生人肺炎链球菌表面蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

1)重组人肺炎链球菌PspA蛋白的制备：