[发明专利]一种氨基残留物检测的通用中间体以及免疫层析检测方法

说明书

本发明公开了一种氨基残留物检测的通用中间体以及免疫层析检测方法，所述通用中间体为生物素标记的乙醛酸，所述生物素连接在乙醛酸的羧基上。检测方法包括以下步骤：（1）制备生物素修饰的乙醛酸；（2）制备氨基残留物抗体修饰的金纳米粒子和质控抗体修饰的金纳米粒子；（3）生物素修饰的乙醛酸与氨基残留物反应，并与氨基残留物抗体修饰的金纳米粒子孵育后；将质控抗体修饰的金纳米粒子与上述待检测物进行混合，制得混合待检测物；（4）试纸条组装与免疫层析检测。该方法借助中间体的作用，将竞争法改为夹心法检测，以生物素作为间接检测对象，通过生物素与亲和素的放大效应，从而提高目标物检测的灵敏度。

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种氨基残留物检测的通用中间体以及免疫层析检测方法。

背景技术

随着科技的进步以及人民生活水平的提高，对食品安全的要求日益严格，因此对食品安全检测技术的有效性研究显得更加迫切。要达到这一目的除了提高人们防范的意识之外，更多的是我们必须选择一种方便普及的检测方法进行监督，免疫学检测技术的发展为这一目标的达到提供了技术上的可能。

免疫学方法相对于传统和经典的化学检测与仪器检测而言的，其特点是需要的检测速度快，对仪器设备等条件的要求不高，尤其是免疫层析检测方法，能够携带到交易（生产）现场（或在线）实施检测。随着我国食品安全问题受到政府和老百姓的广泛关注，仅靠常规的化学检测已不能满足现场、快速判定的需要，尤其是对于大批量的样品常规检测耗费时间长、成本高、要求相关条件复杂。免疫层析方法在现场用十几分钟甚至几十分钟即可判定该食品是否食用安全，既快速方便、又省钱。再者，即使政府监管部门对市场上产品的日常监测，由于样品量大，也可先用免疫层析方法对其筛选，发现有问题的食品再上仪器定量分析，这样可以节省大量的人力物力。因此，免疫层析技术近几年发展很快，在日常监测领域发挥了越来越重要的作用，广泛应用于农药残留、兽药残留、食源性病原菌和真菌毒素等方面的检测。

然而，现有的免疫层析检测方法已经成为一种比较成熟的技术，随着对危害物检测灵敏度的要求越来越高，在现有设计原理的基础上，需要不断开发新的检测方法，才能满足日益增长的检测需求。

发明内容

为了解决以上现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种氨基残留物检测的通用中间体以及免疫层析检测方法。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种氨基残留物检测的通用中间体，所述通用中间体为生物素标记的乙醛酸，所述生物素连接在乙醛酸的羧基上。

进一步的，所述生物素为氨基聚乙二醇生物素，生物素通过氨基与乙醛酸的羧基相连接。

进一步的，所述氨基残留物包括金刚烷胺、磺胺类、克仑特罗、或抗生类，所述磺胺类包括磺胺甲基嘧啶（磺胺甲嘧啶）、磺胺甲恶唑（磺胺甲鯻唑）、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶（磺胺地索辛）、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉（磺胺喹沙啉），所述抗生类包括庆大霉素、卡那霉素、安普霉素、链霉素、氟苯尼考胺或新霉素。

一种氨基残留物的免疫层析检测方法，包括以下步骤：

（1）乙醛酸上的羧基与生物素进行连接，制得生物素修饰的乙醛酸；

（2）分别制备氨基残留物抗体修饰的金纳米粒子和质控抗体修饰的金纳米粒子，并按照比例混合好分装于96孔板的微孔中；

（3）将生物素修饰的乙醛酸加入含有氨基残留物的组织样本中并与氨基残留物发生化学交联，通过水性缓冲液震荡离心提取交联有氨基残留物的衍生物，或者有机溶剂提取后氮吹后复溶得到待检测液，然后取100μL将其与步骤（2）制得的混合物在37℃的条件下孵育，孵育完成后插入试纸条进行检测；