[发明专利]一种食品中有机磷的检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种食品中有机磷的检测试剂盒，其特征在于，该检测试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包括以下组分：缓冲液、氯金酸、还原剂和pH调节剂，所述第二试剂包括以下组分：酶液、显色剂和底物。

2.根据权利要求1所述的一种食品中有机磷的检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为乙酸-乙酸钠缓冲液、磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、寡聚糖-醋酸盐缓冲液或磷酸盐-柠檬酸缓冲液中的任意一种，所述缓冲液的pH值为8-9。

3.根据权利要求2所述的一种食品中有机磷的检测试剂盒，其特征在于：所述还原剂为连二亚硫酸钠、柠檬酸三钠、硼氢化钠、抗环血酸或辛酸亚锡中的任意一种，所述还原剂的浓度为1-10g/L。

4.根据权利要求3所述的一种食品中有机磷的检测试剂盒，其特征在于：所述酶液为乙酰胆碱酯酶，所述酶液的浓度为0.3-1μg/ml，所述底物为硫代乙酰胆碱，所述底物的浓度为5-8mg/ml，所述pH调节剂为硫酸或氢氧化钠水溶液，所述硫酸水溶液的质量分数为5-10%，所述氢氧化钠水溶液的质量分数为10-20%。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的一种食品中有机磷的检测试剂盒，其特征在于：所述显色剂由8-16g二硫代二硝基苯甲酸和0.8-1.6g碳酸氢钠溶解在1L缓冲溶液中配制而成。

6.一种食品中有机磷的检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：

（1）样品的前处理；

（2）样品的定性检测；

（3）标准曲线的制作；

（4）样品的定量检测。

7.根据权利要求6所述的一种食品中有机磷的检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：

（1）样品的前处理：使用缓冲液对样品进行萃取，离心，得萃取液，备用；

（2）样品的定性检测：取步骤（1）所得的萃取液置于试管中，然后向试管中依次加入氯金酸、还原剂和pH调节剂，涡旋，混匀，静置，观察颜色变化；

（3）标准曲线的制作：

向比色管中加入缓冲液，再向比色管中加入酶液和显色剂，摇匀，水浴中放置一段时间，用紫外可见分光光度计测定上述溶液的吸光度值，然后再加入底物，摇匀，比色管内开始显色反应，一段时间后，用紫外可见分光光度计测定反应后溶液的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A₀；

取若干只比色管，分别向比色管中加入不同量的有机磷的混合标准溶液，定容，配制成不同浓度的标准曲线系列溶液，向上述标准曲线系列溶液中分别加入酶液和显色剂，摇匀，水浴中放置一段时间，用紫外可见分光光度计测定上述溶液的吸光度值A₁，然后再加入底物，摇匀，比色管内开始显色反应，一段时间后，用紫外可见分光光度计测定反应后溶液的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A₁，计算出不同浓度的标准曲线系列溶液对酶的抑制率，分别对不同浓度的标准曲线系列溶液的浓度值取log₁₀，以对不同浓度的标准曲线系列溶液的浓度值取log₁₀为底得到的对数值为横坐标，以其对应的抑制率为纵坐标，作出标准曲线，并求出该标准曲线的回归方程；

（4）样品的定量检测：

取步骤（1）所得到的样品萃取液加入比色管，再向比色管中加入酶液和显色剂，摇匀，水浴中放置一段时间，用紫外可见分光光度计测定上述溶液的吸光度值A₂，然后再加入底物，摇匀，比色管内开始显色反应，一段时间后，用紫外可见分光光度计测定反应后溶液的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A₂，根据抑制率的计算公式计算得出抑制率，将该抑制率带入标准曲线的回归方程，计算出样品中有机磷的含量。