[发明专利]中东呼吸综合征冠状病毒荧光PCR检测试剂盒在审
申请号: | 201811566975.5 | 申请日: | 2018-12-20 |
公开(公告)号: | CN109371174A | 公开(公告)日: | 2019-02-22 |
发明(设计)人: | 不公告发明人 | 申请(专利权)人: | 江苏和创生物科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 212009 江苏省镇江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 冠状病毒 综合征 试剂盒 呼吸 核酸 荧光PCR检测试剂 荧光PCR技术 特异性检测 疾病监测 快速检测 临床诊断 检测 拷贝 灵敏 鉴别 应用 | ||
1.一种用于特异性检测样品中中东呼吸综合征冠状病毒的试剂盒,其中包括PCR反应液、酶混合液、阴性质控品和阳性质控品,PCR反应液中用于核酸扩增反应的引物序列如下:
P1:5`-TGCTAAGAATAGAGCTCGCACTGTT-3`,
P2:5`-TAGTACCAATGACGCAAGTCGCT-3`,
PCR反应液中用于荧光信号监测的寡核苷酸探针的序列如下:
Probe1:5`-X1-TCGCCAGTACCATCAG-Y1-3`,
Probe1荧光报告基团X1为FAM,荧光淬灭基团Y1为MGB。
2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征还在于PCR反应体系为20μl,包括2×PCR缓冲液10μl、10mmol/L dNTP 1.0μl、25μmol/L引物各0.5μl、10μmol/L探针0.2μl、逆转录酶和热启动Taq酶混合液0.8μl、样品RNA 2μl,加灭菌水至终体系20μl。
3.如权利要求1所述的试剂盒,其特征还在于PCR反应循环参数为:
逆转录阶段:42℃,10min;预变性阶段:94℃,10sec;预扩增阶段:变性94℃,5sec;退火50℃,20sec;延伸72℃,20sec;共5个循环;注意本阶段不采集荧光信号;
检测阶段:变性94℃,5sec;退火56℃,50sec;延伸72℃,15sec;共40个循环;在退火步骤检测荧光信号。
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