[发明专利]中东呼吸综合征冠状病毒荧光PCR检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种采用荧光PCR技术特异性检测样品中中东呼吸综合征冠状病毒核酸存在的试剂盒。利用本发明的试剂盒，可快速检测样品中是否存在中东呼吸综合征冠状病毒核酸，该试剂盒能够灵敏地检测并鉴别样品中存在的中东呼吸综合征冠状病毒，其检测下限为10拷贝每反应体系，在疾病监测、临床诊断等领域具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种采用荧光PCR技术特异性检测样品中中东呼吸综合征冠状病毒核酸存在的试剂盒，属于中东呼吸综合征冠状病毒的体外诊断领域。

背景技术

中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East Respiratory Syndrome，MERS)是一种新型的冠状病毒，这种病毒已经被命名为中东呼吸综合症冠状病毒，大多数MERS病毒感染病例发生在沙特。人体内的冠状病毒最早于1960年代在英国被分离出来，病毒因其表面皇冠状的突起物而得名。它可能与人、猪、猫、狗、鼠和鸡的呼吸系统感染相关。2003年中国出现的SARS病毒属于冠状病毒。MERS于2012年9月首次在沙特被发现，继而在中东、欧洲陆续出现病例报告，感染中东新冠状病毒后的症状和非典有些相似，感染者会出现急性、严重呼吸道疾病，伴有发热、咳嗽、气短及呼吸困难，严重的病例会出现肾功能衰竭和死亡。MRES是第六种已知的人类冠状病毒，也是过去10年里被分离出来的第三种。

在实验室检测中，PCR法由于其快速简便的特点逐渐呈现出要替代以病毒培养和血清学检测为主的传统检测方法的趋势。而对于PCR方法来说，引物的特异性是其检测的特异性和敏感性的基础。

本发明针对中东呼吸综合征冠状病毒特异的靶序列设计引物和MGB探针，利用real-time RT-PCR的方法，用来鉴别检测样品中中东呼吸综合征冠状病毒核酸，可以快速获得特异性检测结果。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是快速准确地检测样品中是否存在中东呼吸综合征冠状病毒，提供一种特异性检测中东呼吸综合征冠状病毒的荧光PCR试剂盒。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种特异性检测样品中中东呼吸综合征冠状病毒的试剂盒，组分包括PCR反应液、酶混合液、阴性质控品和阳性质控品。其中PCR反应液主要含有相关的引物和探针、反应缓冲液、Mg2+和dNTP等，酶混合液主要含有逆转录酶和热启动Taq酶，阴性质控品为无RNase和DNase水，阳性质控品为含有中东呼吸综合征冠状病毒检测靶序列的RNA。

PCR反应液中用于核酸扩增的引物为P1和P2，P1和P2为针对中东呼吸综合征冠状病毒基因组群特异性保守序列设计并经预实验筛选出的特异性引物；PCR反应液中用于荧光信号监测的寡核苷酸探针为Probel，Probel为针对中东呼吸综合征冠状病毒基因组群特异性保守序列设计并经预实验筛选出的特异性探针，其中荧光报告基团X1为FAM，荧光淬灭基团Y1为MGB(见表1)。

表1检测中东呼吸综合征冠状病毒的引物和探针序列