[发明专利]使用胎盘间充质干细胞治疗卵巢早衰的方法和细胞制剂

说明书

本发明涉及使用胎盘间充质干细胞治疗卵巢早衰的方法和细胞制剂。具体的，本发明一方面涉及一种细胞制剂，其是通过使间充质干细胞例如胎盘间充质干细胞混悬于0.9％氯化钠溶液中配制成的细胞混悬液，该细胞制剂是通过包括方法制得的：将细胞传代所得间充质干细胞转移至离心管中，离心，弃上清，加入0.9％氯化钠溶液重悬，制得细胞制剂。所述间充质干细胞是通过包括如下步骤的方法制备得到的：胎盘小叶的处理，混合酶消化及终止，收集原代细胞，原代细胞冻存，细胞复苏，细胞传代，细胞检测、冻存、与数据库关联。本发明制得的细胞制剂在治疗卵巢早衰方面呈现优异的生物学效应。

技术领域

本发明属于生物技术和生物医药领域，涉及使用干细胞治疗卵巢早衰(prematureovarian failure，POF)的方法以及所用的细胞制剂。具体地说，本发明涉及从胎盘中分离干细胞，特别涉及从胎盘中分离间充质干细胞，进而使用此种胎盘间充质干细胞治疗卵巢早衰，更特别的是涉及一种使用本发明所述独特配方的消化酶组合物从而从胎盘组织中分离间充质干细胞并培养成间充质干细胞，进而使用此种胎盘间充质干细胞治疗卵巢早衰。使用本发明方法可以有效的提高从胎盘分离间充质干细胞的效率，进而能够有效的提高使用此种胎盘间充质干细胞治疗卵巢早衰的效果。

背景技术

卵巢早衰(premature ovarian failure，POF)是指卵巢功能衰竭所导致的40岁之前闭经的现象。是一种以闭经、不孕、雌激素缺乏、卵泡减少和促性腺激素增高为特征的疾病，并伴有一系列低雌激素症状如：潮热多汗、面部潮红、性欲低下等，严重影响女性的身心健康。此外，POF的女性，患骨质疏松症、心血管疾病和痴呆的风险增加。POF在女性中占1-3％，近年来发病率呈上升趋势。

POF病因复杂，尚未完全阐明，但与自身免疫应答、感染、遗传因素、化疗、放疗、手术等治疗效果及内分泌功能障碍有关。目前，POF的最常用的治疗方法是激素替代疗法(hormone replacement therapy，HRT)。该疗法虽然对POF的临床症状具有一定的缓解作用，然而，HRT不能从根本上修复受损的卵巢，恢复卵巢功能。此外，研究表明，长期HRT治疗增加心脏病和中风的风险，可能会增加乳腺癌和自身免疫性疾病的风险。因此，需要新的治疗策略来恢复POF患者的卵巢功能。

以干细胞特别是间充质干细胞为基础的治疗，为POF患者带来新的希望，可能改善其卵巢功能，恢复生育能力。

间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)例如人类的间充质干细胞最早是从骨髓中分离出来的，来源于中胚层的一类具有多向分化潜能和自我更新能力的组织干细胞，在体内和体外特定条件下具有向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、内皮细胞、神经细胞、肌细胞、肝细胞等多种成体细胞分化的能力(Caplan AI.Mesenchymal stem cells.JOrthop Res.1991,9:641-650.Pittenger MF,Mackay AM,Beck SC,et al.Multilineagepotential of adult human mesenchymal stem cells.Science.1999；284:143-147)。最新的研究表明间充质干细胞具有免疫调节和造血支持作用，而且易于外源基因导入表达。因此间充质干细胞不但是组织工程化骨、软骨和心肌构建中的种子细胞，基因治疗中重要的载体细胞，而且由于间充质干细胞促进造血重建和抑制移植物抗宿主反应功能，在造血干细胞移植和器官移植中具有广泛的应用前景。间充质干细胞具有体外贴壁生长的特性，利用这种特性，人们已经成功从肝脏、肾脏、胰腺、肌肉、软骨、皮肤、外周血等多种组织中分离培养出间充质干细胞。