[发明专利]一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（a）混合对照品溶液的制备：

分别精密称取白杨素、黄芩素、白杨素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、木蝴蝶苷A、黄芩苷和木蝴蝶苷B对照品，加甲醇溶解定容至25mL，即得白杨素、黄芩素、白杨素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、木蝴蝶苷A、黄芩苷、木蝴蝶苷B浓度分别为12.594μg/mL、69.600μg/mL、32.286μg/mL、128.256μg/mL、31.512μg/mL、60.276μg/mL的混合对照品储备液，即得；

（b）供试品溶液的制备：

取木蝴蝶配方颗粒，研细，取0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入60-80%乙醇50-100mL，称定重量，超声处理15-30分钟，取出，放冷，用60-80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤膜滤过，即得；

所述木蝴蝶配方颗粒的制备方法为：取木蝴蝶饮片，以水为提取溶媒，加水煎煮两次，每次加投料量5~10倍量的水，煎煮0.5~2小时，合并滤液，滤过；滤液真空减压浓缩至相对密度为1.02~1.10的清膏；取清膏进行喷雾干燥，得干浸膏粉，干浸膏粉干法制粒得粒度在16～40目的木蝴蝶配方颗粒；

（c）超高相液相色谱测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µl，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，其中色谱条件为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为276nm，流速为0.28mL/min，进样体积为1μL，柱温为30℃；

（d）特征图谱的建立：

将多批木蝴蝶配方颗粒的色谱图，采用“中药色谱特征图谱相似度评价系统”进行数据匹配，建立木蝴蝶配方颗粒的特征图谱，确定具有6个共有峰，以1号峰为参照峰S，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1：1.00、峰2：1.20、峰3：1.22、峰4：1.35、峰5：1.52、峰6：1.68，相对保留时间在规定值的±10%之内；

（e）相似度评价：计算各批次木蝴蝶配方颗粒的相似度，木蝴蝶配方颗粒的相似度均大于0.90；

（f）特征图谱峰指认：采用UPLC-Q-TOF-MS方法确认6个共有峰成分，其中，色谱条件为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.01%甲酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为276nm，流速为0.28mL/min，进样体积为1μL，柱温为30℃；

质谱条件为：

电喷雾离子源ESI⁺，喷雾电压为1.55kV；脱溶剂温度为597℃，离子源温度为148℃；脱溶剂气流为997L/hr；氮气流为1L/hr；质谱扫描采用多反应检测MRM扫描模式。

2.根据权利要求1所述的一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，步骤(b) 供试品溶液的制备：

取木蝴蝶配方颗粒，研细，取0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，功率为300W，频率为40KHz，取出，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm滤膜滤过，即得。

3.根据权利要求1所述的一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，还包括步骤（g）含量测定：按照供试品溶液的制备方法及质谱条件测定，计算木蝴蝶配方颗粒中的白杨素、黄芩素、白杨素-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、木蝴蝶苷A、黄芩苷和木蝴蝶苷B 6个共有峰成分的含量。

4.根据权利要求3所述的一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，质谱条件中监测离子及相关电压参数设定如下表所示：

5.权利要求1-4任一项所述的一种木蝴蝶配方颗粒UPLC特征图谱的构建方法在木蝴蝶配方颗粒质量评价和检测中的应用。